文档介绍：阳-HPLC 法测定龙胆泻肝制剂中马兜铃酸 A
含量及其药物动力学研究
摘要
1. RP唰HPLC 法测定龙胆泻肝制剂中马兜铃酸 A 含量龙胆泻肝为我国中药方剂中传统名方,也是中国药
典 2000 年版一部收载的品种。该方剂包括三种制剂即
丸剂〈水丸、蜜丸〉、口服液和片剂,均由龙胆、柴胡、黄苓、梳子、泽泻、木通、车前子、当归、地黄、炙甘草组成,具有清肝胆,利湿热的功效,临床用于治疗肝胆湿热,头晕目赤,耳鸣耳聋,耳肿疼痛,协痛口苦, 尿赤涩痛,湿热带下。
然而,自从美国食品和药品管理局(FDA) 公布通告禁止含马兜铃酸 A 或怀疑含马兜铃酸 A 的药剂的生产、销售、进口以来,很多国家都限制了含马兜铃酸 A 药剂的使用。按照这一通告,龙胆泻肝丸〈水丸、蜜丸〉、口服液和片剂均在受禁之列。我国国家药品监督局己作出慎用龙胆泻肝丸的规定 d 广大医务工作者已经在慎重对待或研究其毒性。
龙胆泻肝方剂中含有的马兜铃酸 A 具有一定的肾毒性,尤其是马兜铃酸 A 在体内可以蓄积。则深入研究制剂中含有的马兜铃酸 A 的多少具有重要的临床意义。
目的2 采用反相高效液相色谱法测定龙胆泻肝丸(水丸〉、口服液和片剂中马兜铃酸 A 的含量,以比较它们含
有的马兜铃酸 A 量的差异。
方法: (1 ) 提取:龙胆泻肝丸〈水丸〉和其片剂细粉以甲醇索氏回流提取后,蒸干溶剂,残渣用 %的氢氧化纳溶液溶解,酸化后用***仿分次振摇提取(龙胆泻肝口服液直接酸化用***仿提取),将提取液蒸干,甲醇溶解。(2) 色谱条件:选择合适的固定相,调整流动相的组成、配比、流速以便马兜铃酸 A 色谱峰分离完全。(3) 系统适用性试验:在确定的色谱条件下,考察马兜铃酸 A 色谱峰的分离度、理论板数、对称度等是否符合要求。(4) 标准曲线的制备:配制系列浓度的马兜铃酸 A 对照品溶液,分别进样测定峰面积,以马兜铃酸 A 对照品溶液浓度为横坐标,相应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线(5) 最低检测限试验:逐步稀释马兜铃酸 A 对照品溶液,进样,直至马兜铃酸 A 色谱峰的峰高为噪声三倍。 (6) 稳定性试验:取供试品溶液分别放置 0 ,2 ,4,6,8,10,
12h 后,按己确定的色谱条件测定峰面积。 (7) 精密度试
验:取龙胆泻肝丸(水丸),制备供试品溶液,按己确定的色谱条件重复进样 5 次,记录峰面积。(8) 重现性试验:
取同一龙胆泻肝丸〈水丸) 5 份,制备供试品溶液后,进样,测定马兜铃酸 A 的含量。(9) 回收率试验:依次取龙胆泻肝丸〈水丸〉的细粉适量,分别加入马兜铃酸 A 对照品溶液,进样,测定马兜铃酸 A 的含量。(10) 样品含量测定 z 分别取龙胆泻肝丸(水丸〉、龙胆泻肝口服液、龙胆泻肝片,制备供试品溶液,进样,按外标法计算马兜铃酸 A 的含量。
结果: (1 ) 最佳色谱条件: Cl8 色谱柱,紫外检测器 p
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以甲醇·水-冰醋酸(59: 40: 1) 为流动相,检测波长为
315nm ,+min-l,柱温为25 ØC ,灵敏度: ,进样量为20μ10 (2) 系统适用性试验:在上述色谱条件下,马兜铃酸 A 峰形良好,无杂质峰干扰,其理论塔板数大于 4000 ,-- ,保留时
Ín左右,与相邻色谱峰的分离度均大于3口 (3) 标准曲线的绘制:马兜铃酸 A 浓度在 -- l 范围内与峰面积有良好的线性关系,回归方程为 y= + ,相关系数r= (n=8)o (4) 最低
检测限: 1o (5 )样品稳定性试验:样品溶液在 12h 内稳定。(6) 样品精密度试验:重复进样 5 次后,峰面积的 RSD 为 % 0 (7) 样品重现性试验 z 马兜铃酸 A 含量的相对标准偏差为 % ,重现良好。(8) 回收率试验2 样品的平均回收率为 98..61%0
RSD 为 % 0 (9) 含量测定结果:龙胆泻肝丸〈水丸) 中马兜铃酸 A 的量为 % ,龙胆泻肝片中马兜铃酸A 的最为 % ,龙胆泻肝口服液中马兜铃酸A 的量为 'mr 1 o
结论z 龙胆泻肝丸〈水丸〉中马兜铃酸 A 含量最高,
而龙胆泻肝口服液及片剂含马兜铃酸 A 则较低,可能与生产工艺或与川木通混用有关。
关键词: RP幽,HPLC ,龙胆泻肝,马兜铃酸A ,含量测定
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2. 龙胆泻肝丸〈水丸〉中马兜铃酸 A 药物动力学研究
本文通过比较关木通及其复方制剂龙胆泻肝丸〈水
丸)的药代动力学特点,研究他们中马兜铃酸 A 在体内的吸收、分