文档介绍：参考关松萌等编制的土壤酶及其研究法
土壤蔗糖酶
3,5- 二硝基水杨酸比色法:
试剂的配制
3,5- 二硝基水杨酸溶液:,溶于20ml2N氢氧化钠和50ml水中,加30g的酒石酸钾钠,用水稀释至100ml.(不超过七天)
:1/15M磷酸氢二钠()( KH2PO4溶于1L蒸馏水中)。
8%蔗糖溶液。
甲苯。
标准葡萄糖溶液:将葡萄糖先在50—58℃条件下,真空干燥至恒重。然后取500mg溶于100ml苯甲酸溶液中(5ml还原糖/ml),即成标准葡萄糖溶液。—。
标准曲线绘制:取1ml不同浓度的工作液,并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色,比色后以光密度值为纵坐标,葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。
2、操作步骤称5g风干土,置于50ml的三角瓶中,注入15ml8%蔗糖溶液,5ml 。摇匀混合物后,放入恒温箱,在
37℃下培养24h。到时取出,迅速过滤。从中吸取滤液1ml,注入50ml容量瓶中,加3ml3,5- 二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min,随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。
溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色,最后用蒸馏水稀释至50ml,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的误差,每一土样需做无基质对照,整个实验需做无土对照。
无土对照:不加土样,其他操作与样品实验相同。
无基质对照:以等体积的水代替基质,其他操作与样品实验相同。
结果计算蔗糖酶活性以24小时后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。
葡萄糖(毫克)=a×4
式中:a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数
4——换算成1g土的系数
土壤淀粉酶
3,5- 二硝基水杨酸比色法:
1、试剂配制
1%淀粉。
甲苯。
:1/15M磷酸氢二钠()( KH2PO4溶于1L蒸馏水中)。
3,5- 二硝基水杨酸溶液:,溶于20ml2N氢氧化钠和50ml水中,加30g的酒石酸钾钠,用水稀释至100ml.(不超过七天)
麦芽糖()标准溶液:—2mg麦芽糖液为标准液。
标准曲线绘制:分别取不同浓度麦芽糖标准液1ml,移于50ml容量瓶中,加2ml 3,5- 二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min,随即将容量瓶移至自来水流下冷却。定容后在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
2、操作步骤称5g风干土,置于50ml的三角瓶中,注入10ml 1%淀粉溶液,再加10ml 。摇匀混合物后,放入恒温箱,在37℃下培养24h。
培养结束后,将悬液迅速过滤。从中吸取滤液1ml,注入50ml容量瓶中,然后按绘制标准曲线的显色方法进行比色测定。
为了消除土壤中原有的蔗糖、麦芽糖引起的误差,每一土样需做无基质