文档介绍：虎杖、当归醇提工艺研究
虎杖、当归为常用中药,虎杖的化学成分主要为白藜芦醇类[1]、蒽醌类。虎杖苷(白藜芦醇苷)为虎杖中的主要有效成分,具有显著的扩血管作用,对冠状动脉、脑血管、肺血管、肝血管等都有扩张作用,并对血管平滑肌细胞内钙离子、pH具有双向调节作用。在虎杖制剂中,对其有效成分虎杖苷可以采用一定浓度的醇提取。本研究采用正交设计[2-3]的方法,以乙醇为提取溶媒,对该制剂处方中的主要药味虎杖、当归的醇提工艺条件进行优选,为工业化生产提供参考依据。 1 仪器与试药 LC-10AT高效液相色谱仪,SPD-10A紫外检测器;Apollo色谱柱:Apollo C18-A(250 mm× mm,5 μm);N3000色谱工作站; 电子分析天平(AY120 Shimadzu mg~120 g);恒温水浴锅(DK-SZZ型)。虎杖、当归药材购自湖南三湘中药饮片有限公司,经检验均为合格药材。虎杖苷(批号111575-200502)由中国药品生物制品检定所提供。乙***为色谱纯,水为重蒸水,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
虎杖苷含量测定
色谱条件
色谱柱为Apollo C18-A柱(250 mm× mm, 5 μm);乙***-水(23∶77)为流动相;检测波长306 nm; mL/min;柱温30 ℃。理论塔板数按虎杖苷峰计算不低于3 000。在此条件下,供试品色谱中虎杖苷与其它组分的色谱峰可达基线分离(见图1)。
对照品溶液的制备
mg,置100 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,取1 mL置于10 mL
量瓶中,加甲醇至刻度,即得( 6 mg/mL)。
供试品溶液的制备与测定
取各提取液,(指醇提浓度、醇提次数、正交试验、正交验证试验的提取液) μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。精密吸取对照品与供试品溶液适量,注入高效液相色谱仪,测定峰面积,计算。
乙醇浓度对浸出量的影响
依处方比例称取虎杖、当归,分别加入浓度为40%、50%、60%、70%、80% h,回流提取2次,加醇量分别为8、6倍,、 h,分别收集5种不同浓度的提取液,然后测定浸膏得率与虎杖苷的浸出量。结果表明,虎杖、当归以60%乙醇提取,其虎杖苷的浸出量最高。
提取次数考察
按处方比例称取虎杖、当归,加60% h,回流提取3次,加醇量分别为8、6、6倍,、、 h,收集合并第1、2次提取液,定容,再收集第3次提取液,定容,测定虎杖苷的浸出量。结果表明,第3次提取的浸膏得率与虎杖苷浸出量均小于3次总量的10%,故提取2次即可。
试验结果
g、 g,共9份,根据表2安排试验。由直观分析可知,以浸膏得率为评价指标,A、B、C三因素的极差(R)与离差平方和(Sj)均少于空白列相应的值,故可认为各因素对浸出均无影响。而以虎杖苷浸出量为评价指标,由直观分析可知,其最佳提取工艺条件为A2B3C1,各因素的主次顺序为B、C、A,其中B、C因素经方差分析表明,对虎杖苷浸出量有极显著性影响,A因素影响不明显(方差分析中,考虑A因素的SA比空白列的S空白小,故认为A因素对虎杖苷浸出量没有影响,并将SA与S空白合并作为误差估计,以提高分析的精确度,见表3)。根据上述分析,A因素无论是以浸膏得率还是以虎杖苷浸出量为指标,其对浸出均未见明显的影响,故可任取一个水平,为缩短生产时间,取A1为佳;B、C因素在上述2种评价指标中,均以B3、C1为佳。因此,可确定醇提工艺的最优条件为A1B3C1,即提取时加60% h,提取2次,加醇量分别为药材的10、8倍,、 h。表3 虎杖苷方差分析表(略)注:*(2,4)=,(2,4)=;** SE=SA+S空白
验证试验
由于优选的醇提工艺条件A1B3C1在正交表中没有出现,因此必须进行实验予以验证。
按处方比例称取虎杖25 g、当归10 g,按优选方案(A1B3C1)加60%乙醇进行提取,收集提取液,定容,测定浸膏得率及虎杖苷的浸出量。结果表明,优选方案(A1B3C1)重复3次试验的虎杖苷浸出量均稍高于正交表中浸出量最高的6号方案,从而证明这一方案合理可行(见表4)。表4 验证试验结果(略)
3 讨论
正交试验设计是研究多因素多水平的一种设计方法,它是根据正交性从全部试验中挑选出部分有代表性的点进行试验,这