文档介绍：台
微生物菌种常规保藏技术规程(试行)
《自然科技资源收集、整理、保存技术规程研究与制定》
项目组
二〇〇四年十二月十日
目次
前言………………………………………………………………………………………2
引言………………………………………………………………………………………3
1范围…………………………………………………………………………………………4
2定义…………………………………………………………………………………………4
3基本原则……………………………………………………………………………………5
4方法…………………………………………………………………………………………5
附录 A 定期移植保藏法…………………………………………………………………6
附录 B 液体石蜡保藏法…………………………………………………………………9
附录 C 沙土管保藏法…………………………………………………………………11
参考文献……………………………………………………………………………………13
前言
本规范由台建设项目提出。
本规范起草单位:中国农业科学院土壤肥料研究所、中国食品发酵工业研究院、中国兽医药品监察所、中国科学院微生物研究所、中国林业科学研究院森林保护研究所、中国药品生物制品检定所、中国医学科学院医药生物技术研究所。
本规范主要起草人:程池、李金霞、胡海蓉、姜瑞波、顾金刚、周宇光、朴春根、叶强、张月琴、陈敏等。
引言
微生物菌种常规保藏是一类重要的基本操作技术,广泛应用于科学研究、教学及生物技术产业,是保护微生物菌种资源的重要手段,是科研教学及生物技术产业正常运转的重要保障。本规程包括定期移植保藏法、液体石蜡保藏法和沙土管保藏法三种常用微生物菌种保藏方法。
制定本规程是为了规范微生物菌种常规保藏技术操作,加强管理,以达到保护微生物菌种资源,利用微生物菌种资源及实现资源共享的目的。
微生物菌种常规保藏技术规程
1范围
本规程规定了微生物菌种常规保藏技术的基本原则和方法。
本规程适用于微生物菌种的常规保藏工作。
2定义
本规程采用下列定义。

微生物菌种资源 anism resources
指可培养的有一定科学意义、具有实际或潜在实用价值的古菌、细菌、真菌、病毒、细胞株等及其相关信息数据。

菌种保藏 culture preservation
是指将微生物菌种用各种适宜的方法妥善保藏,避免死亡、污染,保持其原有性状基本稳定。

定期移植保藏法 subculturing
亦称传代培养保藏法,包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中,最适条件下培养,待生长充分后,于4℃-6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。

液体石蜡保藏法 preservation under liquid paraffin
亦称矿物油保藏法,定期移植保藏法的辅助方法。是指将菌种接种在适宜的斜面培养基上,最适条件下培养至菌种长出健壮菌落后注入灭菌的液体石蜡,使其覆盖整个斜面,再直立放置于4℃-15℃进行保存的一种菌种保藏方法。

沙土管保藏法 sand preservation
亦称载体保藏法。是指将培养好的微生物细胞或孢子用无菌水制成悬浮液,注入灭菌的沙土管中混合均匀,或直接将成熟孢子刮下接种于灭菌的沙土管中,使微生物细胞或孢子吸附在载体上,将管中水分抽干后熔封管口或置干燥器中于
4℃-15℃进行保存的一种菌种保藏方法。
3基本原则
应针对菌种特性选择适宜方法进行保藏。
应保证菌种保藏的安全性,不能对周围环境造成污染和危害。
4方法
定期移植保藏法
见附录A。
液体石蜡保藏法
见附录B。
沙土管保藏法
见附录C。
定期移植保藏法
适用范围
本方法适用于大多数细菌和真菌。
原理
低温条件下保藏可减缓微生物菌种的代谢活动,抑制其繁殖速度,达到减少菌株突变,延长菌种保藏时间的目的。
保藏培养基一般含较多有机氮,糖分总量不超过2%,既能满足菌种培养时生长繁殖的需要,又可防止因产酸过多而影响菌株的保藏。
技术要求
不同菌种应根据要求选择合适的培养基。
接种时要求无菌操作,避免染菌。
保藏期间要定期检查菌种存放的房间、冷库、冰箱等的温度、湿度,各试管的棉塞有无污染现象,如发现异常应取出该管,重新移植培养后补上空缺。
大量菌种同时移植时,各菌株的菌号、所用培养基要进行核对,避免发生错误。
每次移植培养后,应与原保藏菌株和菌株的登记卡片逐个对照,检查无误后再存放。
斜面菌种应保藏相继三代培