文档介绍：人1,4,5-三磷酸肌醇ELISA快速检测试剂盒
使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
产品编号:CSB-E12636h
检测范围:4 pg /ml -1000 pg /ml
最低检测限: ng/ml
特异性:本试剂盒可检测IP3,且与其他相关蛋白基本无交叉反应。
有效期:6个月(2-8℃避光保存)
预期应用:ELISA法定量测定人血清,血浆及其它相关生物液体中IP3含量。
说明
浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
采用竞争酶联免疫法法检测IP3含量。首先用一株羊抗兔单抗体包被微孔板,制备成固相抗体,然后加入待测标本及辣根过氧化物酶标记IP3和抗IP3抗体。经显色后在酶标仪测定吸光值(OD值),通过计算机或作图拟合浓度-吸光度曲线,反算出待测标本中IP3含量。
试剂盒组成及试剂配制
酶联板(Assay plate ): 一块(96孔)。
标准品(Standard): 5×。
标准品为冻干品,,溶解后浓度分别为:
Standard 1
Standard 2
Standard 3
Standard 4
Standard 5
4 pg/ml
pg/ml
pg/ml
250 pg/ml
1000 pg/ml
酶结合物(HRP-conjugate): 1×6ml/瓶。
抗体(Antibody) 1×6ml/瓶。
显色剂A(Substrate A): 1×7ml/瓶。
显色剂B(Substrate B): 1×7ml/瓶。
浓洗涤液(Wash Buffer): 1×15ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。
终止液(Stop Solution): 1×7ml/瓶
需要而未提供的试剂和器材
标准规格酶标仪
高速离心机
电热恒温培养箱
干净的试管和Eppendof管
系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等
标本的采集及保存
血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:以上标本置4℃保存应小于1周,-20℃或-80℃均应密封保存,-20℃不应超过1个月,-80℃不应超过2个月;标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
操作步骤
将各种试剂至室温〔18-25℃〕平衡半小时,取浓缩洗涤液,根据当批检测数量,用蒸馏水上1:20稀释,混匀后备用。
将酶标板取出,设一个空白对照孔、不加任何液体;每个标准点依次各设两孔,每孔加入相应标准品50ul;其余每个检测孔直接加待测标本50ul。
每孔加入酶结合物50ul(空白对照孔除外),再各加入50ul抗