文档介绍：免疫组织化学注意事项
1、为达到免疫组织化学技术的要求,组织固定越新鲜越好。
2、组织脱水必须彻底干净。
3、切片必须完整、均匀、平展、无皱折。
4、切片的附贴必须牢固,必须使用合适的粘贴剂。新的载玻片,放于玻璃清洗液中浸泡4小时甚至过夜,然后取出,经自来水彻底冲洗后,浸入酒精中达2小时以上,取出擦干备用或烘干也可。然后再将载玻片浸入3-氨基-三乙氧基-硅烷(3-Aminopropyl triethoxy- silane)的稀释液(1:50用***或无水乙醇稀释都可以)中硅化10分钟,后经无水乙醇洗2次,烘干即可使用。
5、切片必须烘烤附贴牢固,既要经得起抗原修复时高温的作用而不使轻易脱片,又不至于破坏抗原,切片在60℃的恒温干燥箱中烘烤2-5小时最为合适。
6、切片脱蜡必须干净,否则将会影响免疫组化染色的最后结果。
7、必须彻底抑制内源性过氧化物酶的活性,才能降低背景的染色。H2O2甲醇较适合于大多数的情况,因为除了H2O2外,甲醇对各种酶,都有钝化的作用,因此H2O2甲醇的双重作用效果较好。
           8、抗体的加入须注意的问题:①当PBS冲洗完毕后,在加入抗体,如一抗,二抗或三抗。必须将存留于切片上的多余的PBS摔干,但不能让切片干涸,切片干涸,往往可产生非特异性染色,切片上PBS存留过多,将会稀释加入的抗体,影响加入抗体的浓度,同时也将影响最后的结果,如假阴性等。②加入的抗体以一滴为佳。当擦干组织块周边多余的PBS后,切片保持着一定的湿润度,此时加入另外的抗体为最佳时候,滴入抗体以一滴50μl为好,加入后,轻微地摇匀地覆盖于切片上,使最后的结果稳定均衡,不至于有的地方有反应,有的地方无反应。③切片没擦好将会影响加入抗体的质量。当加入抗体后,它可缩于切片的一边,此时你为了使加入的抗体能够完全地覆盖整个切片,便会使劲地加入抗体,此时的结果是,抗体依然滑向一边,或者完全露出,这不光没达到目的,还浪费抗体,正确的做法就是彻底地用PBS冲洗,摔干切片擦干切片周边的PBS,再滴入一滴抗体轻轻摇匀即可。