文档介绍：ABO 血型鉴定
测定原理
根据红细胞上有或无 A 抗原或/和 B 抗原,将血型分为 A 型、B 型、AB 型及O 型4种。可利用红细胞凝集试验,通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型,是用已知抗—A 和抗—B 分型血清来测定红细胞上有无相应的 A 抗原或/和B抗原;所谓反定型,是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或/和抗—B。
标本种类及收集要求
1 受检者血清.
2 EDTA2K抗凝血或未稍取血,受检者血液制成5 %红细胞盐水悬液使用。
3 标本出现中度溶血者,为不合格标本,不能用于检测。
仪器、试剂、校准品、质控品、以及其他所需物品
离心机,显微镜。
抗A、抗B血型定型试剂(单克隆抗体):长春博德生物技术有限责任公司
产品注册号:国药准字S10960881。
包装:抗A、抗B各1支/盒,塑料瓶,规格:10ml/支。
储存要求:2℃~8℃避光保存,主要成分:分泌抗人 A 型和抗人 B 型血型原单抗的杂交瘤细胞培养上清液并补加一定量小鼠腹水抗体。
/%的生理盐水:山东齐都药业有限公司。
操作步骤:
试管法
1 取洁净小试管(内径10mm×60mm)3支,分别标明抗—A、抗—B和抗—A十 B,用滴管分别加抗—A、抗—B 和抗—A 十 B 分型血清各 l 滴(约 50 ul)于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴,混和。
2 另取洁净小试管(内径 10mm×60mm)3 支,分别标明 A、B 和 O 细胞。用滴管分别加入受检者血清 l 滴于试管底部,再分别以滴管加入 A、B和O型5%试剂红细胞悬液l滴,混和。
3 立即以1000r/min离心 3 min。
4 将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜检查。
5 观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度,此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。
6 凝集强度判断标准
4+ 红细胞凝集成一大块,血清清晰透明。
3+ 红细胞凝集成数小块,血清尚清晰。
2+ 红细胞凝块分散成许多小块,见到游离红细胞。
1+ 肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。
± 镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多游离红细胞。
MF 混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝集,而极大多数红细胞仍呈分散分布。
- 表示阴性,镜下未见凝集,红细胞均匀分布。
玻片法
1 取清洁玻片 1 张(或白瓷板 1 块),用蜡笔划成方格,标明抗-A、抗-B和抗-A十B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于标明的方格内,再各加受检者2%红细胞悬液1滴,混和。
2 另取洁净玻片一张(或白瓷板1块),用蜡笔划成方格,标明A细胞、B细胞和 O 细胞,用滴管各加受检者血清 1 滴,再分别用滴管滴加 A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。
3 将玻片(或白瓷板)不断轻轻转动,使血清与细胞充分混匀,连续约 15 min,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)反应;再在低倍镜下观察结果。
5、结果判定
ABO 血型正反定型结果
分型血清+受检者红细胞受检者血型受检者血清+试剂红细胞
抗-A 抗-B