文档介绍：中图分类号密级
脂肪源性干细胞对冻伤创面愈合作用的研究桑晨
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指导教师:刘晓燕教授
申请学位级别:硕士学位学科专业:整形外科学
完成时间:二。一三年四月
培养单位:大连医科大学
沈阳军区总医院
答辩委员会主席:独创性声明
本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作
及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,
论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得大
连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工
作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表
示谢意。
学位论文作者签名:缒
签字日期:
丝年羔月鱼日关于学位论文使用授权的说明
本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保
留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借
阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库
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本学位论文属于请在以下相应方框内打“√”:
.保密口,在一年解密后适用本授权书。
.不保密毗
日期:训;年月/日
作者签名:绿嚣
日期:泸乃年岁月/。日
导师签名:≯彬,
一
目录
一、摘要?
一中文摘要
二英文摘要
二、正文?
一前言一刖舌“?~..?“一”“??一”?
第一部分大鼠冻伤模型的建立
,
.
.方法
.?
.主要检测指标?
三结果
.冻伤大体观
.组织染色
.血流灌注量变化分析四讨论第二部分标记脂肪源干细胞最适条件的研究
。主要试剂及仪器
.方法
。脂肪干细胞获取、分离及培养?
. ?
.主要检测七匕日标三结果
.体外分离培养
.流式细胞仪鉴定
.细胞爬片染色
.细胞免疫荧光
.标记率分析四讨论
第三部分
自体脂肪干细胞治疗对冻伤创面的影响
二材料和方法
.
.主要试剂及仪器
.
.
标记
.主要检测指标三结果
.
.免疫荧光染色
.双标染色四讨论
三、结论四、参考文献?
五、综述?
一综述二参考文献
六、攻读学位期间发表文章情况??一
七、致谢大连医科大学硕士学位论文
脂肪源性干细胞对冻伤创面愈合作用的研究
硕士研究生:桑晨
指导教师:刘晓燕教授
指导小组:刘民培教授
黄威教授
专业名称:整形外科学
摘要
目的:提取脂肪源性干细胞并培养:观察干细胞形态及生长传代情
况;建立大鼠局部冻伤模型;探索脂肪源性干细胞对局部冻伤的治疗作用,为
冻伤治疗探索新思路。
方法:切取双侧腹股沟皮下脂肪组织。用酶消化法提取,.培养
基培养,×个/接种于培养皿。利用倒置显微镜对原代细胞进行形态学观察,
培养干细胞至第三代,并应用流式细胞仪鉴定。
苷一标记,并行细胞免疫荧光染色,于荧光显微镜下观察标记情况;
建立大鼠冻伤模型:于动物背部设计直径的圆形创面,通过手动制压泵
将液氮匀速泵出喷射于实验区,致伤时间分别为、、、。致冻次日应用激
光多普勒血流探测仪测定血流灌注量并行统计学分析。处死动物后行皮肤组织
染色。于致冻后,,对只大鼠个创面进行大体观察。采用含
/应用于冻伤大鼠, 组空白对照
标记的第三代干细胞浓度
组,组经尾静脉注入经标记的悬液,组经尾静脉注射.%
***化钠注射液,组局部注射标记的悬液,组局部注射.%
***化钠注射液,分别于移植术后,处死大鼠,切取冻伤创面进行组织固
定,石蜡包埋,切片,染色及免疫荧光染色。观察移植细胞参与创面愈合的情
况。
结果:细胞呈成纤维细胞样生长,原代培养的细胞~即达%以上融合。
可进行常规传代培养。流式细胞仪鉴定第三代细胞表达:、表达阳性,
、表达呈阴性。应用手动液氮制压泵致冻时间可造成大鼠背部
/
皮肤重度冻伤创面。体外标记第三代,孵育后标记率大连医科大学硕士学位论文
达%左右。体内示踪实验组:细胞移植后大鼠创面局部及边缘可见
标记的阳性细胞聚集;对照组中未发现明显的聚集现象;抗/、
抗/波形蛋白免疫双标技术检测结果显示:在创伤部位有部分分化,
提示血管内皮细胞和成纤维细胞参与创面愈合。
结论:取材方便,体外培养及扩增迅速,具有干细胞特性。应用手动液
氮制压泵致冻可建立标准重度冻伤模型。大鼠自体脂肪源性干细胞参与冻伤
创面愈合。
关键词:冻伤脂肪源性