文档介绍：SDS聚丙烯酸胺凝胶电泳
SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是对蛋白质进行量化、比较及特性鉴定的一种经济快速而且可重复的方法。该法主要依据蛋白质的分子量对其进行分离。蛋白质在一定浓度的SDS中与SDS分子按比例结合,SDS能破坏蛋白质分子间的非共价键,使蛋白质变性并失去原有的空间构型,形成带负电荷的SDS一蛋白质复合物。这种复合物由于结合了大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态,形成仅保持原有分子大小为特征的负离子,从而降低和消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异。这样各种SDS一蛋白质复合物在电泳中不同的泳动仅反应了分子量的不同,且蛋白质分子量的对数同其相对迁移率呈直线关系。根据此原理可以制成各种参考蛋白质分子量的对数和它的相对迁移率的标准曲线,从而求得被测蛋白质的分子量。
EPS500/400
(Bio-RAD MiniPROTEAN 11 CELL)
。
低分子量---97,400kd 66,200kd 43,000kd 31,000kd 20,100kd 14,400kd
中分子量---66,000kd 45,000kd 36,000kd 29,000kd 24,000kd 20,100kd 14,200kd
4·30%凝胶贮液
单体丙烯酰胺
双体N,N’-甲叉双丙烯酰胺
加双蒸水至 100ml
过滤后棕色瓶4℃保存
Tris-Hcl
Tris-Base
加双蒸水50ml,,加双蒸水定容至100ml
6、浓缩胶缓冲液
Tris-Hcl
Tris-Base
加双蒸水50ml,,加双蒸水定客至100ml
7、10%SDS(W/V)100ml 室温保存
8、10%过硫酸铵(W/V)l-5ml,4摄氏度存放(过硫酸铵会缓慢分解,每次配液量不宜多,隔周新鲜配制)
9、N,NNN一四甲基乙二胺(TEMED)
10、Tris一甘氨酸电泳缓冲液
5x储存液:在900ml去离子水中溶解
Tris-碱
甘氨酸 94g 72g
SDS 5g 用去离子水补至1000ml
11、2X样品缓冲液(室温储存)
Tris-HCL,
冰醋酸 10ml
甲醇 20ml
去离子水 70ml
脱色液
冰醋酸:甲醇:去离子水 1:2:7
三、操作步骤:
l、准备好用于灌胶的玻璃板和间隔片。用去污剂温溶液洗涤玻璃板和间隔片,用自来水彻底冲洗,再用去离子水洗净。用乙醇冲洗玻璃板,并置于一旁晾干。
2、组装凝胶模具(可按厂家说明书)装配好灌胶用的模具,在上紧螺丝之前,必须确保凝胶玻璃板和隔片的底部与一个平滑的表面紧密接触,防凝胶渗漏
3.、按所需丙烯酰胺浓度配制一定体积的分离胶溶液,依次混合水、30%丙烯酰胺、 Tris-HCI 、10%SDS、10%过硫酸铵,一旦