文档介绍：实验三酶促转氨反应
一实验原理
氨基酸分子上的氨基转移到α-***酸分子上的反应称转氨反应。由转氨酶催化的转氨反应是氨基酸代谢的重要反应之一。经转氨后,原来的氨基酸变成了***酸,而原来的***酸则变成新的氨基酸。
在动物机体中活力最强、分布最广的转氨酶有两种:一种为谷氨酸***酸转氨酶(简称GPT),另一种为谷氨酸草酰乙酸转氨酶(简称GOT)。它们的催化反应如下:
GPT
丙氨酸+α-***戊二酸谷氨酸+***酸
此反应最终产物都是***酸。测定单位时间内***酸的产量即可得知转氨酶的活性。
***酸可与2,4 – 二硝基苯肼反应,形成***酸二
硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色。再与同样处理
的***酸标准液进行比色,计算出其含量,以此测
定转氨酶的活性。
  ***酸 + 2,4 – 二硝基苯肼→***酸二硝基苯腙(棕红色)
1. ——用剪刀将叶片剪碎——放于研钵中。
2. 量取4ml磷酸缓冲液,分三次加入研钵中(2,1,1),研磨成浆状,到入离心管中,5000rpm 离心10min, 上清液即为酶粗提液。
二实验步骤
3. 取4支试管——编号——按下表要求加样:
试管号
1
(空白管)
2
(对照管)
3
(标准管)
4
(样品管)
酶粗提液(ml)

Ala和α-***戊二酸(ml)

标准***酸液(ml)

磷酸缓冲液(ml)

试管扎牢置于40℃水浴中加热30min。
2,4-二硝基苯肼反应5min 再每支试管各加5ml NaOH溶液摇匀静止10min 在λ=530nm下,测量吸光度OD值。
三、计算:
按下式计算***酸生成量:
Cx=样品中***酸含量
Cs=标准***酸溶液含量()
V=标准***酸溶液毫升数
Dl=样液OD530
D2=标准液OD530
D3=对照管OD530