文档介绍：酶促转氨反应一实验原理氨基酸分子上的氨基转移到α- ***酸分子上的反应称转氨反应。由转氨酶催化的转氨反应是氨基酸代谢的重要反应之一。经转氨后, 原来的氨基酸变成了***酸, 而原来的***酸则变成新的氨基酸。在动物机体中活力最强、分布最广的转氨酶有两种: 一种为谷氨酸***酸转氨酶(简称 GPT ) ,另一种为谷氨酸草酰乙酸转氨酶(简称 GOT ) 。它们的催化反应如下: 丙氨酸+α- ***戊二酸谷氨酸+ ***酸此反应最终产物都是***酸。测定单位时间内***酸的产量即可得知转氨酶的活性。***酸可与 2,4 –二硝基苯肼反应,形成***酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色。再与同样处理的***酸标准液进行比色,计算出其含量,以此测定转氨酶的活性。***酸+ 2,4 –二硝基苯肼→***酸二硝基苯腙(棕红色) 二实验步骤 1. 称取叶片——用剪刀将叶片剪碎——放于研钵中。 2. 量取 4ml 磷酸缓冲液, 分三次加入研钵中(2,1,1), 研磨成浆状, 到入离心管中, 5000rpm 离心 10min, 上清液即为酶粗提液。支试管——编号——按下表要求加样: 4. 加样完毕---- 摇匀---- 用橡皮筋将 4支---- 试管扎牢---- 置于 40℃水浴中加热 30min 。 5. 取出冷却---- 每支试管各加 2, 4- 二硝基苯肼---- 反应 5min ---- 再每支试管各加 5ml 的 NaOH 溶液---- 摇匀---- 静止 10min 在λ=530nm 下,测量吸光度 OD 值。三、计算: 按下式计算***酸生成量: Cx= 样品中***酸含量 Cs= 标准***酸溶液含量() V= 标准***酸溶液毫升数 Dl= 样液 OD530 D2= 标准液 OD530 D3= 对照管 OD530 2 31SXD ) ( = ?