文档介绍：第三军医大学
硕士学位论文
NHE1基因调控细胞内酸碱平衡对SGC-7901胃癌细胞生物学行为
的影响
姓名:滕小春
申请学位级别:硕士
专业:内科学(消化系病)
指导教师:刘海峰
20040501
丝鲇吼巡矽盈』趁生耋第三军医大学研究生学位论文独创性声明第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书论文作者签名:指导教师签名:秉承学校严谨的校风和科研作风,本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查料,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定,即:研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离校后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医大学。学校有阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩,可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。
英文缩写词一览表二甲基亚砜信使核糖核酸增殖指数磷酸缓冲盐水英文缩写英文全称碱基对’一二氨基联苯胺脱氧核苷三磷酸道尔顿极限必需培养基千碱基对二苯基四氮唑溴盐钠。’鷍基荧光素互补脱氧核糖核酸乙二胺四乙酸培养基一一一籺一一∞猣——籋籋猙
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基因调控细胞内酸碱平衡对胃癌细胞生物学行为的影响摘要侍褰榈嫉淖H炯际踅ǚ匆逭婧吮泶镏柿:、细胞内值、蛋白表达、体外生长状况、细胞周期以及双层软琼脂克隆细胞笮∠喽砸恢拢岣唬私人跣。朔至严嗌偌一细胞和转染空过度交换,从而导致细胞内酸化,使档汀一细胞与赴啾任廾察欤珹赴に俣让飨约趼鱿纸哟ヒ种疲实ゲ闵ぃ欢鳽一赴ナЫ哟ヒ种疲っ芗愕ぁA魇较赴欠治鱿允荆珹细目的:胞膜离子交换蛋白瓾换槐玫亚型.,谴在于所有真核细胞的一种跨膜蛋白,是维持细胞内值,在中性或偏碱性的重要膜蛋白,是鹘诘闹匾;浦弧=昀囱芯糠⑾郑琋蛟肿瘤细胞中的表达水平明显增高,与肿瘤的发生和抗凋亡生长有密切关系。基因超表达是阻止癌细胞内酸化,使癌细胞免遭凋亡,以维持其抗凋亡生长特性的重要机制之一。本课题试图通过基因转染技术,研究反义基因对赴┫胞增殖、凋亡及其生物学行为的影响,探讨通过使细胞内酸化诱导肿瘤细胞凋亡治疗胃癌的新方法。方法:利用亚克隆技术构建人反义结构基因哺乳动物真核表达质粒,通过细胞中,经聚合酶链反应宰H净虻恼霞ê螅鄄旎蜃H径韵赴翁形成能力和裸鼠成瘤力的影响。结果:翁Ч鄄欤汗饩迪拢H綨匆寤虻腟一胃癌细胞载体的赴┫赴赴则大小不~,形态多样,核分裂相多见,巨核细胞及多核巨细胞多见。透射电镜下,,细胞线粒体数量增多、体积增大,并可见髓鞘样变,粗面内质网、戏⒋铮谥释┱牛似蛞徊啵栽銮俊6鳶一细胞和赴赴鞑环⒋铮舜螅巳释怀觥测定:一细胞胞内值为.,显著低于赴蚐一细胞内值.±.,。表明转入反义基因成功阻止了基因表达,阻断了籋显差别,从而排除空载体本身对细胞的影响。赴逋馍で呒跋赴芷冢毫第三军医大学硕士学位论文
.%。:在接种鱿赴宦闶蟮那榭鱿拢周后接种数降低,细胞凋亡增加,细胞周期轻度左移,在软琼脂培养其中的生长能力降低,裸鼠体内致瘤能力显著降低。提示反义基因对赴┫赴亩裥孕形S是胃癌细胞增殖、逃避凋亡的主要机制之一。匆寮际醺稍た墒筃虮泶锵调,导致细胞内酸化,诱导细胞凋亡,达到了有效治疗胃癌的目的。提示通过使细胞内酸化,诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖治疗胃癌的可行性,为胃癌基因治疗提供了新一细胞增殖指数与矛赴啾龋岫冉档汀免疫组化染色显示:一细胞染色比赴一细胞浅淡,着色少,表明蛋白表达明显减少。ú闳砬碇嘌周后:.细胞集落形成率为.‰,而赴蚐一细胞分别为±搿±耄臣蒲Х治鱿嗖钕细胞裸鼠皮下长出肿瘤,成瘤率为ィ觹一细胞裸鼠皮下未长出肿瘤,结论:晒菇薔匆寤虿溉槎镎婧吮泶镏柿#⒊晒ψH赴┫赴首次发现转染反义基因后,赴┫赴赴发生数量和形态学方面的变化,胃癌细胞形态恶性程度降低。H綨匆寤赴┫赴に俣让飨约趼鱿纸哟ヒ种疲实ゲ闵ぃ鲋持明显抑制作用。蛟谖赴┲斜泶镌黾樱纬上赴诩