文档介绍：中文摘要��:�在临床感染中常常引起血样腹泻,贫血和肾脏的衰竭,严重者常常危及患者生命。由于采用抗生素疗法能够导致�甤����:�的细胞壁溶解促进细胞***的释放而加重病程,在临床中针对�甤��和保守疗法为主。为了有效预防�甤����:�在临床中的感染,本文针对大肠杆菌��:�主要免疫原��进行了口服植物疫苗研究。��:�的主要侵入途径是消化道,因此在疫苗的研究中如何能够激起机体有效的粘膜免疫是研究的重点。注射免疫途径的疫苗往往不能有效诱导肠道内的特异免疫反应。如果口服疫苗抗原没有经过特殊的处理而直接进行口服免疫时,能够有效到达肠道并激起肠道内淋巴系统特异反应的抗原量太低,也不能有效诱导肠道内的免疫反应。近十年来的研究表明,植物疫苗能够很好的解决这些免疫过程中遇到的困难。在植物表达重组抗原的过程中,由于植物的细胞壁能够对在植物细胞内表达的重组目的蛋白进行“胶囊”样包裹,因此在植物细胞壁的保护下,表达的抗原能够顺利进入肠道,并在消化系统对植物细胞进行肠道内消化时,释放出目的抗原,从而激发有效的粘膜免疫。生菜作为种植广泛,生长期短,成本低廉的常见蔬菜,具有可以生食的特点,因此在采用转基因生菜免疫时,避免了采用烟草、土豆、水稻等植物表达的重组蛋白在口服免疫时需要对植物疫苗进行预处理的缺点,生菜转基因疫苗能够将在植物细胞内表达的蛋白顺利地运送到肠道,刺激肠道淋巴系统的反应,因此生菜口服植物疫苗的研制在临床使用中具有可行性好,免疫成本低,免疫途径简单,免疫效果可靠的特点,便本研究通过对生菜中表达的来源于�甤����:�的��生物学特性的研究,证实了大肠杆菌的��可以作为植物疫苗研究中的免疫原。本研究首次在植物细胞内进行了�甤����:�表面蛋白��的瞬时表达及稳定表达研究,并分别对以两种体系中表达的重组蛋白进行了动物实验。实验通过试验小鼠的多克隆��抗体的体内及体外保护性试验,证实了免疫试验小鼠产生的多克隆��抗体的对��细胞的保护性作用,并通过�甤�����突变株的小鼠攻毒后的肠道病理研究发现��免疫后的小鼠具有对�甤����:�的感染以预防由于�甤��于疫苗的推广。山东人学博�学位论文�甤����:���:�
/���的抵抗力。第一部分:致病性大肠杆菌基因组中移动的基因元件决定了致病性的细菌的毒力,他们在病原菌侵入动物或植物后发挥毒性的过程中起着关键的作用。其中毒力岛��基因簇上�多个基因编码蛋白的功能集合体���头置谙低�����谙妇�的致病过程中发挥重要的作用。在��系统中,很多与毒力相关的亚单位的装配机制与细菌鞭毛的装配机制类似,其致病蛋白的装配过程均发生在细胞的外壳上。大肠杆菌黏附过程中分泌的蛋白如��,��,��和��等蛋白都是��的功能蛋白。��及��蛋白位于��微丝的末端,这些蛋白与宿主的细胞膜相互作用,在宿主的细胞膜上形成小孔后,效应因子如��珽�����,��和��ü�纬傻目椎澜�胨拗鞯南赴�1臼匝槭状卧谏�酥胁捎�瞬时表达体系表达了�甤��将构建好的���.��,������载体通过液氮冻融法分别导入农杆菌��,���,����珿���虲��后,将带有重组质粒的农杆菌在卡那抗性和利福平抗性的��嘌��欣┐笈嘌��捎谜婵辗ㄗH九嘌��斓�无菌生菜小苗,转染生菜在�℃培养�旌螅�觳飧骶�曜H旧�撕驟��谋�达水平,试验发现农杆菌��转染的生菜中��的表达量最高,农杆菌����H镜纳�说腅��牧孔畹停�ü�觳鈖���籩��蚿������转化农杆菌���后通过真空法转染生菜,发现���一���榫哂斜冉细�的��表达量,通过对瞬时体系中重组蛋白的表达研究,确定了不同农杆菌菌株在生菜瞬时表达系统中的不同的转染能力,这是首次在生菜瞬时表达的系统中进行此类综合研究。通过免疫小鼠的实验证实生菜细胞内瞬时表达的��能够刺激小鼠产生高水平的��虸�抗体,这是首次关于植物表达�甤��的主要免疫原��的疫苗报道。第二部分:在对致病性大肠杆菌的研究中,通常根据大肠杆菌对��的黏附特性,来区分大肠杆菌��和��。���������匝���是鉴定�甤����的主要方法,同时��细胞也成为�甤����进行细胞毒性试验的常用模式细胞。在本部分中,乳酸菌免疫小鼠产生的多克隆抗体及生菜瞬时表达系统表达的��:�的��蛋白。山东人学博���节沦史��:�����
重组蛋白免疫小鼠产生的抗体分别用来进行��细胞的黏附试验、体外抗体与��:�/���结合试验和抗体抑制菌落的生长试验。通过这�鍪笛橹�实��特异的抗体能够阻断�甤����:�����蛳赴�诙拘缘鞍椎淖R疲���:�/��.�腥鞠赴���奶匾煨缘南赴�羌芨谋洌���体外的实验中,抗体与细胞相互作用后,再用�甤����:��痩���腥鞠赴��并不能阻止细菌与细胞的黏附。试验的多克隆抗体能够结合�甤