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指导教师:
普鲁卡因LD50的测定
【目的要求】通过实验了解测定药物LD50的方法、步骤和计算过程。
【实验用品】
仪器:注射器、针头、鼠笼、天平
动物:小鼠体重17~25g(♂♀各半,应注明性别,实验前禁食12h,不禁水)
药品:2%普鲁卡因溶液
【方法】
(1)探索剂量范围
取小鼠8~10只,2只为一组,分成4~5组,选择组距较大的一系列剂
量,分别按组腹腔注射普鲁卡因溶液,观察出现的症状并记录死亡数,找出引起0%及100%死亡剂量的所在范围(参考剂量164mg/kg,最大剂量250mg/kg)。
(2)进行正式实验
在预初实验所获得的0%和100%致死量的范围内,选用几个剂量(一般用3~5个剂量,按等比级数增减,相邻剂量之间呈1::)。尽可能使半数组的死亡率都在50%以上,另半数组的死亡率都在50%以下。各组的动物数应相等或相差无几,每组10只,动物的体重和性别要分层随机均匀分配。
完成动物分组和剂量计算后按组腹腔注射给药。最好先从中剂量组开始,以便能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适,否则可随时进行调整。
(3)统计实验结果
给药后经过一定时间,清点各组的死亡小鼠数。用改良寇氏法计算普鲁卡因的LD50。
(4)课堂实验
将结果用改良寇氏法计算LD50。取小鼠50只,随机分成5组,按表中剂量分组给药,腹腔注射2%盐酸普鲁卡因,观察并记录表中项目,小鼠注射1~2min出现中枢兴奋,后转为抑制,最后死亡。不死者一般在15~20min内恢复正常,故观察30min内死亡即可,将结果列入实验表1。
实验表1 普鲁卡因急性毒性实验数据表
组别
小鼠(只)
剂量(mg/kg)
lgD(X)
死亡数(只)
死亡率(P,%)
1
10
250

2
10
225

3
10
203

4
10
182

5
10
164

【结果分析】用改进寇氏法计算LD5