文档介绍：华南师范大学实验报告
学生姓名庄立栋学号 20072401052
专业理综2班年级、班级 2007级
课程名称生物化学实验实验项目 Folin——Wu法测定血液葡萄糖含量
实验类型□验证□设计□综合实验时间 2008 年 11月 10 日
实验指导老师陈文利/徐杰实验评分
一、实验目的:
掌握Folin-Wu法测定血糖含量的原理和方法。
二、实验原理:
因为葡萄糖的半缩醛羟基是具有还原性的,所以通过加热,葡萄糖的半缩醛羟基被氧化为羧基,同时将碱性铜试剂中的二价铜离子还原为黄色的氧化成黄色的氧化亚铜沉淀。氧化亚铜可使磷钼酸还原成兰色的钼蓝,葡萄糖浓度越大,蓝色越深,故可用比色法测定钼蓝的光吸收值来测定葡萄糖的浓度。
由于血液成分复杂,血液中的许多种蛋白质存在会干扰血糖的测定。因此可用钼酸法处理抗凝血来制备无蛋白滤液,再用无蛋白滤液来测定滤液在中的葡萄糖含量。
血糖的测定结果还会因氧化亚铜被空气中的氧氧化而受影响。因此,需用带有细颈的Folin——吴宪式血糖管来使溶液尽量减少与空气的接触。
三、材料试剂与器具:
(一)、试剂:
抗凝血、草酸钾、%苯甲酸溶液、10%钨酸钠溶液、1/3mol/L硫酸溶液、标准葡萄糖溶液()碱性铜试剂、磷钼酸试剂;
(二)、器具:
试管及试管架、小漏斗、水浴锅、电炉、烧杯、Folin——吴宪式血糖管、分光光度计、移液管、比色杯。
四、步骤:
(一)、制备无蛋白滤液:
;。小心擦去管外血液后,于试管底部缓缓放出血液。吸取试管内蒸馏水吹洗移液管数次后,充分摇匀,使血液完全溶血;加入1/3mol/L硫酸溶液1mL,边加边摇,摇匀后放置5min;加入10%钨酸钠溶液1mL,边加边摇,摇匀后放置5min;过滤,收集滤液备用(过滤时应于漏斗上盖一表面皿,防止水分蒸发)。若滤液不清,应重新过滤至溶液澄清为止。
血溶液加硫酸、钨酸钠除去蛋白质
(二)、血糖的测定:
1、取血糖管3支,按下表进行编号后操作。(单位:mL)
血糖管编号
试剂(mL)
空白管
标准管
测定管
蒸馏水
2
无蛋白血滤液
2
标准葡萄糖液
2
碱性铜溶液
2
2
2
混匀,沸水浴中煮8min,勿摇动取出,流水冷却
磷钼酸试剂
2
2
2
蒸馏水
19
19
19
2、充分混匀。
3、用分光光度计比色测定620nm吸光值A。
(三)、血糖浓度计算结果:
测定管A620 100
每100mL血液葡萄糖的mg数= ──────× 标准葡萄糖的mg数× ───
标准管A620
五、结果与分析:
1、血糖的测定:
现象:
血糖管编号
现象
空白管
标准管
测定管
现象一(沸水浴后)
溶液呈浅蓝色
砖红色沉淀产生
砖红色沉淀产生
现象二(加磷钼酸后)
冒气泡,溶液褪色
冒气泡,溶液蓝色加深
冒气泡,溶液蓝色加深
现象一(沸水浴后) 现象二(加磷钼酸后)
比色杯调零结果:
1号比色杯
2号比色杯
3号比色杯
用分光光度计比色测定620nm吸光值A:
比色杯号
1号比色杯