文档介绍：自杀质粒
自杀质粒(suicide plasmid):通常为R质粒的衍生质粒,常有宿主范围广的特点,具有接合转移基因。它的复制需要一种特殊的蛋白,大多数细菌不产生这种蛋白质,因此,当进入寄主细胞时,要么不能复制,被消除,要么被整合入染色体上,和染色体一起复制。利用自杀质粒的这个特点,将基因工程技术构建的基因缺失的DNA片断,克隆入自杀质粒,利用缺失基因两端的同源片断,定位自杀质粒的整合位点。利用同源性DNA片断可发生重组的原理,构建精确基因缺失菌株。在多数情况下,利用自杀质粒,可随心所欲缺失大多数基因的任何部分。
用自杀质粒系统构建基因缺失工程菌,关键在于选择适当的自杀质粒,自杀质粒应具备以下条件:①自杀质粒在受体菌中不能复制;②自杀质粒必须带有一个在整合到染色体内以后可供选择的抗性标记;③自杀质粒带有易于克隆的多克隆位点。
正常情况下整合入受体基因组后可以组成型表达病毒基因组基因,严重影响宿主基因组复制,最终导致宿主死亡并且产生大量的质粒释放。故称之为自杀性质粒。
谁能帮我解释一下自杀质粒还有基因敲除的机理?
自杀质粒的复制需要一种特殊蛋白,大多数细菌不产生这种蛋白质,因此,当进入寄主细胞时,要么不能复制,被消除,要么被整合入染色体上,和染色体一起复制。利用自杀质粒的这个特点,将基因工程技术构建的基因缺失的DNA片断,克隆入自杀质粒,利用缺失基因两端的同源片断,定位自杀质粒的整合位点。利用同源性DNA片断可发生重组的原理,构建精确基因缺失菌株。在多数情况下,利用自杀质粒,可随心所欲缺失大多数基因的任何部分。
什么是同源自杀质粒
匿名提问
2009-12-24 10:39:58 发布
11373364 | 2009-12-24 11:27:02
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基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术,是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理,用设计的同源片段替代靶基因片段,从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展,除了同源重组外,新的原理和技术也逐渐被应用,比较成功的有基因的插入突变和iRNA,它们同样可以达到基因敲除的目的。
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. 利用基因同源重组进行基因敲除
基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初,胚胎干细胞(ES细胞)分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。1985年,首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年,Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型[1]。直到现在,运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。
(图1):
a. 基因载体的构建:把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的DNA 分子都重组到带有标记基因(如neo 基因,TK 基因等)的载体上,成为重组载体。基因敲除是为了使某一基因失去其生理功能,所以一般设计为替换型载体。
细胞的获得:现在基因敲除一般采用是胚胎干细胞,最常用的是鼠,而兔,猪,鸡等的胚胎干细胞也有使用。常用的鼠的种