文档介绍：美白剂实验研究及临床应用
大连医科大学附属第二医院皮肤科
涂彩霞

(1)美白活性成分分析
是指通过高效液相色谱等方法对美白化妆品中的美白活性物质进行种类和含量的测定。

(2)细胞水平功效测定
检测内容:黑素含量测定、酪氨酸酶活性、蛋
白表达、mRNA水平测定、信号传导通路等。

(2)细胞水平功效测定
1)细胞模型
B16黑素瘤细胞
大多数研究中,采用B16黑素瘤细胞检测色素抑制作用(PI)
1)细胞模型
melan-a或mel-ab黑素细胞或正常人黑素细胞(nHEM) 正常人黑素细胞(nHEM)更好的模拟体内环境,但黑素细胞更难维持培养。
源于小鼠或人皮肤的黑素细胞和角质形成细胞共培养更贴近体内环境,体外系统的皮肤等效模型(SEM)也用于皮肤美白研究。
2)主要实验方法
酪氨酸酶活性检测方法有放射性同位素法、免疫学法和生化酶学法,其中以生化酶学法较为简单成熟,如氧化多巴法。
细胞中色素含量测定是美白化学物功能评价的最重要检测指标。目前多采用生物化学-分光光度法测定黑素细胞中的黑素含量,此法经典稳定。
2)主要实验方法
信号传导通路蛋白表达—Western Blot,免疫组化,流式细胞术,ELISA等
mRNA转录—Rt-PCR
(3)动物实验
棕色豚鼠模型
黄棕色豚鼠皮肤黑素细胞和黑素小体的分布近似于人类,试验结果重复性好,常采用UV或α-MSH诱导色素沉着。
斑马鱼模型
对显示美白制剂体内毒性具有意义
(4)人体实验
视觉评分—主观性强,不精确
照相对比—受光线及拍摄条件的影响
FoToFinder dermoscope 仪,由摄像机和显微镜头组成,可以对色素沉着区进行拍照、放大,并进行图像处理,计算各种参数如皮损大小、边缘情况、结构参数,同时作出安全评价,是一种常用的色斑评价法。