文档介绍：甲肝定量测定
Abbott AXSYM SYSTEM
原理
使用Abbott AXSYM System 检测血浆或血清中总Anti-HAV
1 疾病的急性期抗体:IgM anti-HAV(决定疾病急性期最可靠的标志是病毒特异的IgM anti-HAV )
2 恢复期并可持续多年的抗体:IgG anti-HAV
竞争法:样品中的anti-HAV与酶标抗体(与碱性磷酸酶结合的Anti-HAV)竞争结合微球上的Hepatitis A Virus
原理
1 样品+微球上的HAV结合,形成抗原抗体复合物
2 微球与玻璃纤维杯不可逆结合
3 加入酶标抗体,与微球上未与样品中anti-HAV结合的位点结合
4 洗脱未结合酶标抗体
加入底物MUP
碱性磷酸酶催化从MUP移除一个磷酸集团生成产物4-methylumbelliferone(MU)
MU由荧光照射后产生荧光,由光学系统测量
试剂
定标液:AxSYM HAVAB Quantitative Standard Calibrators(REF 3C76-01)
质控液: AxSYM HAVAB Controls(REF 6C70-10 )
试剂: AxSYM HAVAB Reagent Pack(REF 6C70-20)①酶标抗体,② Hepatitis A Virus包被的微球
稀释液: AxSYM HAVAB Quantitative Specimen Diluent(REF 3C76-50)
AxSYM 1号液(底物液):SOLUTION 1 MUP(REF 8A47-04)
以上试剂贮存:2-8°C,下面三种试剂贮存于15-30°C
AxSYM 3号液(洗脱液):SOLUTION 3 MATRIX CELL WASH(REF 8A81-04)Ag-Ab结合后洗脱未结合的酶标Ab
AxSYM 4号液(管路冲洗液和FPIA稀释液): SOLUTION 4 LINE DILUENT(REF 8A46)
探针清洗液(系统保养液):PROBE CLEANNING SOLUTION(REF 9A35-04/9A35-05)
注意:甲肝抗体测定,SOLUTION 4是定性检测的稀释液,定量测定有专门的稀释液
试验材料
样品杯sample cups (REF 8A76-01 )
反应杯reaction vessels(REF 8A75-02)
纤维杯matrix cells (REF 8A73-02)
试验方法
样品体积:样品杯172μL,同一样品再次测定,原杯补加122 μL
定标液:垂直加8滴
质控液:垂直加5滴(实验证明3滴足够)
样品
检测样品避免反复冻融(≤6次),解冻后样品需充分混匀并在使用前离心(RCF 10,000×g 10min),取澄清的部分,而不要取脂质层。
样品检测前2-8°C可储存14天,但超过3天测前要重新离心。不确定测定时间的样品在-20°C或更低温度储存。
样品上机后3h内检测
>100mIU/ml的需稀释(1:15,1:200)
定标
定量测定使用的是六点定标(STANDARD CAL)
以下三种情况发生时需重新定标
1 更换批号不同的试剂
2 质控值超出范围
3 进行MEIA光路校正
质控
质控:每日开始检测样品前;新批号试剂定标通过后
阳性或阴性对照超出界值:表明试剂变质或操作错误。要重新定标、样品需重测。
Target Concentration (mIU/ml)
Concentration Range (mIU/ml)
Control+
to <
Control-
to
上次实验问题
上次实验两次测定结果相差很大,原因:
1 第一次质控失控
2 稀释液使用的是定性的稀释液,应当使用定量试剂专用的稀释液
3 样品放置后未离心