文档介绍：关于苹果树腐烂菌的研究
报告人:王娟娟
实验展望及目的
实验材料及仪器
实验方法及步骤
实验预期结果
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苹果树腐烂病(apple tree valsa canker)是我国各苹果产区普遍发生且为害严重的病害,由多种Cytospora 。但由于我国病原菌的种类及其致病性分化情况至今尚不清楚,严重影响了人们对病害发生和流行规律的认识,制约了对病害预测、预报和寄主抗病性的研究, 致使病害防治缺乏相应对策。因此,本文选用在PDA上培养性状差异明显的若干株腐烂病菌分离株为对象,对其生物学特性与致病性的关系进行了研究。
实验目的
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实验材料及仪器
PDA培养基 LB培养基牛肉膏蛋白胨培养基腐烂的苹果枝健康的苹果枝摇床
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致病菌的筛选1
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病原菌的鉴定2
分离菌的回接及致病性测定
教学过程
致病菌的再分离
拮抗菌的筛选
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致病菌的筛选
灭菌培养皿,置于湿纱布上,用无菌操作法向培养皿中加入25%乳酸1~2滴,
然后将冷却至50℃左右的PDA培养基倒入培养皿中,每皿倒10~15ml,轻轻摇动
成为平面。取采集到的苹果腐烂病病组织,选择典型单个病斑,用剪刀从病斑边缘
(病健交界处)剪取小块病组织数块,放入70%酒精浸3s,%升汞液中进行表
面消毒,放入灭菌水中漂洗5次,除去残留的消毒剂。将病组织移至PDA平板培养基上,
每皿4块。重复多次,筛出纯菌。
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病原菌的鉴定
将获得致病菌纯培养物分别移植在PDA、苹果树枝条汁培养基,28℃恒温培
养。每隔3d观察一次菌落培养性状,,并在低倍显微镜观察真菌菌丝,进行初步判定。
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致病菌的再分离
采用常规组织分离法从接种发病枝条分离致病菌,在PDA培养基平板上获得纯培养,并与原接种致病菌进行比较.
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分离菌的回接及致病性测定
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第一步,选取技条:
小段,每个菌种用30段.
第二步,消毒:将切成的小段用7505酒精表面消毒,再
用无菌水冲洗.
第三步,接种:先用烙铁把切成的小段烫伤,再向苹果枝条小段
皮内接入适量的分离纯化苗丝.
第四步,保湿:把接种的枝条小段与对照一同放
入保湿缸内,置于25℃恒温箱内培养
第五步,观察记录:每天观察同时记载发
病情况。。
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拮抗菌的筛选
从土壤中富集细菌,然后在肉膏蛋白胨培养基上培养,根据其形态、菌落初步筛出不同的菌,进一步进行分离纯化。
把土壤中筛出的菌和致病菌共同培养,观察数天,看是否出现抑菌圈,以及抑菌圈的大小。重复该步骤。
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