第11章 细胞悬浮培养和突变体筛选.ppt

文档介绍：第十一章细胞悬浮培养和突变体筛选
细胞悬浮培养的方法和特点
突变的概念及突变体的用途
体细胞无性系变异与细胞突变体筛选
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第一节细胞悬浮培养的方法和特点
细胞悬浮培养(cell suspension culture)是指将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖,或者是诱导形态形成(例如胚胎发生)的无菌培养技术。
相对于采用固体培养基的培养,液体悬浮培养体系在取得状态比较一致的细胞群体,进行突变个体的筛选、以及进行大规模的培养以生产有重要价值的次生物质(药用物质)方面有重要的应用。
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第一节细胞悬浮培养的方法和特点1,细胞悬浮培养的方法
,摇床和三角瓶一般细胞增殖、营养生理等研究、细胞分裂同步化、细胞再分化(胚胎发生)的研究、原生质体供体材料的准备等。
,
,悬滴培养单细胞或少量的原生质体或原生质体融合后的杂种细胞等;
,发酵罐培养用于进行次生代谢物质生产的悬浮培养;
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第一节细胞悬浮培养的方法和特点1,细胞悬浮培养的方法
摇床有两种摇荡的形式,一种是往复式的(来回移动,运动面上的每一个点的轨迹都是一条直线),另一种是涡旋式的(不是旋转,运动面上的每一个点的轨迹都是一个直径相同的圆圈)。
衡量摇床工作状态的两个参数是每分钟的摇荡频率和摇荡的位移距离。此外,运转是否平稳和承载重量是购买时需要考虑的指标。
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传动轴
中心轴
试管
转
轮
试
管
液
体
培
养
装
置
(速度可调)
(角度可调)
示意图
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第一节细胞悬浮培养的方法和特点1,细胞悬浮培养的方法
摇床的作用是使细胞组织在培养基中成为悬浮状态,促进液体培养基(液相)和空气的混合,提高培养基中氧气的含量,使组织细胞不会沉积在培养容器的底部造成缺氧。
因此, 如果是不会被液体淹没的大块组织,可以考虑采用浅层液体培养基静止,这时不需要摇床。
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第一节细胞悬浮培养的方法和特点2,细胞悬浮培养的培养基
一般来说,能够让某种植物细胞组织正常生长增殖的固体培养基去掉固化剂后都可以用来进行该种植物的液体悬浮培养。
对培养基进行适当的改造能够改善培养效果。方法主要有如下几种:
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第一节细胞悬浮培养的方法和特点2,细胞悬浮培养的培养基
提高2,4-D的浓度和降低分裂素的浓度能够提高悬浮细胞的分散程度;
悬浮培养的细胞对维生素和氨基酸的有比较明显的更大量的需求;
无机磷酸盐的消耗比较快,加大无机磷酸盐的浓度(3-5倍)可以维持细胞系较长时间的稳定增殖;
B5和ER(Eriksson,1965)是两种典型的液体培养基。
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