文档介绍：实验四 Fo1in—酚法测定蛋白质含量
Folin-酚试剂法(Lowry法)
一、目的和要求
学****Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法。
进一步掌握分光光度法——求标准曲线、准确测定未知样品、正确使用722或721分光光度计。
二、实验原理
蛋白质浓度测定:
物理化学性质--如折射率、比重、紫外吸收等测定而得知;
化学方法--如凯氏定氮、双缩脲反应、Fo1in—酚试剂法(Lowry法) ,考马斯亮蓝法(Bradford法)等方法
双缩脲法和Fo1in-酚法是实验室中经常使用的方法。
Fo1in—酚法灵敏度高,较双缩脲法灵敏100倍。
Fo1in—酚法是双缩脲法的发展。
Folin-酚试剂由甲试剂与乙试剂组成。
甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜及酒石酸钾钠组成。(碱性)
乙试剂由磷钼酸和磷钨酸组成。(在碱性中极不稳定)
反应过程分为两步:
首先,在碱性溶液中,蛋白质分子中的肽键与碱性铜试剂中的 Cu2+作用生成蛋白质Cu2+ 复合物;
然后,蛋白质Cu2+ 复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基还原乙试剂中的磷钼酸和磷钨酸,生成蓝色的化合物(钼蓝和钨蓝混合物)。
该呈色反应在 30min内即接近极限,并至少可稳定几小时。
在一定浓度范围内,蓝色的深浅与蛋白质含量呈线性关系,所以,可用比色的方法确定蛋白质的含量。
Fo1in-酚法测定蛋白质含量灵敏度较高。在640nm下测定范围是25-250微克。
此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。
本实验以蛋清为材料,测定蛋清的蛋白质含量。
基本操作步骤
1 标准曲线的制作
2 未知样品的测定
3 计算
Y
X
Y=ax+b
三、试剂与器材
(一)试剂
:250μg/mL。
—酚试剂甲
—酚试剂乙
:稀释后用。
(二)器材

(5、1、)

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721分光光度计
722分光光度计
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