文档介绍：肺炎支原体的临床检测方法研究
【】目的:研究不同检测方法对肺炎支原体检出率的灵敏度和特异度,为临床快速、准确检测肺炎支原体寻找线索。方法:将我院2009年5月至2011年12月间拟诊为肺炎支原体感染的729例患者随机分配为三组,每名患者取痰标一份,血清标本两份,分别经肺炎支原体培养、肺炎支原体核酸聚合酶链反应(PCR) 扩增和血清学检测[1](酶联免疫吸附法ELISA), 比较3 种方法的检测结果。结果:%,%%,其中痰培养法与PCR 法比较,差异具有显著性(χ2= 15. 464, P < 0. 001) ;血清学法与痰培养法比较,差异具有显著性(χ2= 6. 238, P < 0. 01) ;而 PCR 法与血清学法比较差异无显著性(χ2= 3. 269, P = 0. 061)。结论:PCR 法与血清学法对肺炎支原体检出率较痰培养法要高,可作为临床检测的首选方法。
【关键词】肺炎支原体;聚合酶链反应;检测技术
1资料与方法
,按照随机化原则将其分为A、B、C三组。其中A组243人,患者年龄在20~51岁之间,平均(±)岁;B组243人,患者年龄在21~54岁之间,平均(
±)岁;C组243人,患者年龄在18~50岁之间,平均(±)岁。所有病人均签署知情同意书,为自愿参与课题研究。
,血液为清晨空腹血。
,加入2ml生理盐水稀释,之后直接接种于支原体培养基(由上海信然生物培养基提供)上,置于37℃恒温箱内培养3到5天。
(PCR)PCR引物为P1: 5-GTTCGTTA TTTGATGAGGGTGCG-3; P2: AGGC
GAGATACTTAATGTGTT-3。PCR 试剂盒购自深圳市康百得生物科技有限公司;DNA 抽提试剂盒购自上海禾尤蒙生物科技有限公司。DNA 的抽取严格按照说明书进行操作,有专人指导,进行质量控制。PCR 扩增的具体程序为:酒精灯94℃预变性5min,94℃变性45 s,56℃退火45 s,72℃延伸10min;共计扩增30个循环,之后收集PCR产物于2%琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下观察结果[2]。
,本研究中采用了ELISA法对患者体内的IgM抗体进行检测[4]。ELISA试剂盒购自北京儿科研究所,严格按照使用使用说明操作,有专人监督,进行质量控制。
,其中计量资料采用均数±标准差(x±S)表示;计数资料采用例数(n)、百分数(%)表示,组间比较采用χ?检验。p<,则差异有统计学意义。
2结果
三种不同检测方法的结果见表1。其中痰培养法与PCR 法比较,差异具有显著性(χ2= 15. 464, P < 0. 001) ;血清学法与痰培养法比较,差异具有显著性(χ2= 6. 238, P