文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
RNA干扰阻断NPM-ALK融合基因表达及其对ALK+淋巴瘤细胞的影
响
姓名:赵艳霞
申请学位级别:博士
专业:儿科血液/肿瘤学
指导教师:顾龙君
20050401
.孺韶缳,,■云作者签名:壑蛰叁学位论文使用授权声明学位论文独创性声明吨学位论文作者签名:翅抱焱本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文巾已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有权傈留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。文中作了明确说明并表示谢意。导师签名:日期:工口口罚日期:.
,约有一半的病人存在特异的染色体易位籷贾号染色合蛋白可导致多种细胞系转化;转基因研究亦发现狝在小鼠体内同样具有致癌性。因此,诤系鞍自诮沂続姆肿硬±砘萍爸瘟浦杏下游信号传导途径尚未明确,并且缺乏针对该种酪氨酸激酶特异抑制剂,瓵在中的功能仍需要迸一步研究。新兴的扇偶际跏且恢指咝У摹⑻匾斓难芯炕蚬δ艿募际酰赡成为一种有效的基因治疗手段。本研究应用扇偶际跹罢艺攵的分子机制,为临床提供一种可能的靶向治疗手段。,设计两个义线性表达载体,通过脂质体转染表达瓵融合蛋白的胞:应用实时荧光定量、、免疫组化检测味和蛋白表达的抑制作用。以点突变的蛄、仅含正义或反义序列编码片段载体为对照检测载体作用的特对恻变性大细胞淋巴瘤,难芯糠体上一种编码核磷酸蛋白,基因与湃旧宓奈时湫淋巴瘤激酶的异常融合蛋白狝。体外细胞实验研究显示,.嘏呕虿娜重要意义,并为临床治疗提供了新的靶点。,并研究对融合基因相关下游信号的影响,进一步探讨狝在形成中的作用和可能分:列甀与甀危璓反应构建含启动子异性。实时荧光定量和检测显示,傻贾,基因发生融合,产生有致癌性乱搴头狝瓵甤上海第二医科大学博一弦德畚
义或反义序列编码片段的载体为对照检测其对肿瘤细胞的影响,同时转染不含瓵融合基因的细胞检测转染试剂和载体的非特异细胞毒性作用。结果发现,转染狪的细胞经觳馐究梢种芀细胞改变,提示琁可以抑制肿瘤生突变靥濉⒌フ寤蚍匆辶丛靥宥訩细胞的生长无明显抑制作用;载体对不含瓵融合基因的细胞无明显增殖抑制作用。说明甀对赴鲋车囊种谱饔檬翘匾煨浴⒂行У模ü重要作用。第三部分对瓵相关下游信号转导分子的影响为进一步探讨可能与瓵融合蛋白转化作用相关的信号转导通路,本研究检测应用检铡了转染靥迩昂驥细胞中っ浮⒘姿峄疉激酶以及与的表达水平的差异;、和甔表达水平的改变。结果显示转染狪的赴衔醋H镜南赴陆翟,%,但蛋白水平均无明显改变。各对照组对赴蠳—无明显影响。实验证明狪可特异地抑制狝融合基因的表达,为研究瓵基因功能及其下游信号提供有效方法之⋯。第二部分对肿瘤细胞生长和增殖的影响为检测瓒螻—。诤匣虮泶锖蠖訩细胞的影响。应用瑞氏染色观察转染后肿瘤细胞形态学的改变,以⑻ㄅ卫度旧ḿ觳靥宥灾琢鱿赴鲋车挠跋欤τ肁,旧ǎ珼等方法检测肿瘤细胞的凋亡。并转染含点突变的蛄小⒔龊的增殖,且荧光显微镜下出现明显的凋亡小体,.染色显示凋亡细胞增加,并出现典型的长、诱导肿瘤细胞凋亡增加。
序列和甀腒赴胛醋H镜南赴冉狭姿峄疉、疭和家族相关基因表达均未有明显改变。本研究提示特异的肿瘤阻断基因的表达,抑制了肿瘤细胞的增殖,使肿瘤细胞凋亡增加,为进一步研究探讨狝功能及靶向治疗提供一有效的方法;同的表达与瓵的转化作用相关,为提供潜在的新治疗靶丶蔧扇舠虮泶锼皆谧H厩昂笪廾飨愿谋WH镜阃槐涞膕瓵融合基因的表达,可引起磷酸化的泶锼郊癇—通路和甔薪厦芮泄叵担赡芪狽—诤匣蛑匾5南掠涡藕欧综上所述,本研究应用扇偶际跎秆〔⒐菇苏攵訬—合蛋白特异的、有效的咝栽靥澹谙赴谕ü种芅—诤时在检测干扰后相关信号分子表达水平的改变后,进一步证实了っ傅磷酸化足瓵融合