文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
生殖细胞核因子在发育中睾丸和附睾表达特征的研究
姓名:周宗瑶
申请学位级别:博士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:王一飞
20040501
生殖细胞核因子在发育中睾丸和附睾表达特征的研究摘要生殖细胞核因子虺艷是核受体超家族成员之~,由于其配体未知,因而又称为孤儿受体鱼和非洲爪蟾中已经克隆。的岷嫌蚝团涮褰岷嫌蛟诓煌镏旨渫葱很高,因而在功能上很可能具高度保守性。在成年人及动物睾丸或卵巢中高表达。在睾丸表达大小分别为和的两个转录子,其中的转录子主要定位于圆形精子细胞,这种表达模式提示在精子发生的特定阶段发挥调节作用。胡远新等发现在小鼠附睾也有表达,除了的转录子外,还发现了的转录子在附睾等器官表达,且两个转录子编码一个蛋白并受雄激素调本研究旨在系统研究生后不同发育阶段的啮齿类动物睾丸和附睾表达的时空规律及其雄激素调控,为进一步研究与精子发生和精子成熟的关系提供研究本研究分两个部分:第一部分:生殖细胞核因子在睾丸和附睾生后发育中的表达目的和方法:采用半定量、实时荧光定量以及间接免疫荧光等方法,从和蛋白水平分别检测基因在小鼠、大鼠睾丸和附睾中的表达及其生后发育中的变化规律。①在小鼠睾丸生后发育中的表达:在生后斓男∈筘和柚屑纯始表达,焓北泶锪亢艿停耸钡腉ㄎ挥诓糠志赴驮缙诰赶赴至生后天,转而定位于刚出现的圆形精子细胞和少部分的粗线期精母细胞,和月老年小鼠则有所降低。从天至月,均定位于圆形精子细胞和部分的粗线期精母细胞。鋏谛∈蟆⑷恕呗证实的转录子在生后斓男∈,推测可能与附睾机能及精子成熟有关。基础。结果:其余细胞均为阴性。表达在天时明显增加,生后天最高,天成年小鼠中文摘要
③在大鼠附睾生后发育中的表达:在生后天大鼠附睾中即开②在小鼠附睾生后发育中的表达:在生后天小鼠的附睾中开始天,附睾起始部、头部和体部近段仍有较多的细胞呈强阳性,而体部远段和尾部的表达明显下降。天成年小鼠附睾体部近段的表达仍为强阳性,而起始部和头部的表达已有所下降,体部远段和尾部几乎为阴性。月表达量非常高,是天成年小鼠的兑陨希獹鞍椎表达在天和月无明显差异。定位于小鼠附睾上皮几乎所有的细胞类型细胞、基细胞、亮细胞、狭窄细胞、顶细胞和晕细胞F渲邢琳赴土料赴蠫阳性细胞数在不同的发育时期无明显变化,主细胞的表达具年龄依赖性,即不始表达,至生后天时,的表达明显增加,附睾起始部、头部、体部、尾部几乎所有的细胞均表现为强阳性。生后天,附睾起始部、头部和体部近段成年大鼠和月老年大鼠附睾起始部、头部和体部近段的表达仍为强阳性,而体部远段和尾部几乎均为阴性。在大鼠附睾上皮细胞的定位与小鼠基本一鉴于在啮齿类动物睾丸与附睾的生后发育过程中有规律的时空表达方式提示可能在精子发生的启动、精子核蛋白转型、精子成熟以及附睾上皮的发育和分化中起重要作用。第二部分:雄激素对生殖细胞核因子在附睾上皮中表达的调控目的和方法:①建立一个简便而有效的大、小鼠附睾上皮体夕嘌低场"ü獾确椒ǎ觤偷鞍姿椒直鸺觳釭蛟谛∈蟆大鼠培养附睾上皮中的表达及其雄激素调控。③通过去势手术以及去势后补充雄激素等手段,进一步研究在体情况下雄激素对附睾上皮表达的调控以及雄激素调控的区域性。①培养附睾上皮的形态学特征:大、小鼠各段附睾上皮在和表达,一天时表达量很低,天开始增加,至生后—天时,的表达明显增加,附睾起始部、头部、体部、尾部均有较多细胞表现为阳性。生后老年小鼠同发育时期其表达量和表达部位均有明显不同。仍有较多的细胞呈强阳性,而体部远段和尾部的表达明显下降。天致。结果:中文摘要
两种培养基中均生长良好。细胞角蛋白间接免疫荧光证实,培养天后约%以②在培养附睾上皮中的表达及其雄激素调控:小鼠附睾头部、体部、尾部上皮在培养旌缶蠫泶铩F渲校珿鞍缀蚼谋达以附睾体培养上皮最高,附睾头培养上皮次之,附睾尾培养上皮则很低。雄激素能明显降低附睾各段培养上皮蛋白和的表达。③去势及雄激素替代对小鼠附睾各段表达的影响:去势后天小鼠附睾各段的表达明显升高,但附睾尾部的表达仍然很低。去势旌笮∈蟾截和凡亢吞部的表达较去势炻晕⑾陆担截何膊縂谋泶镌蛴兴摺Hナ天并补充雄激素旌螅∈蟾截和凡俊⑻宀亢臀膊縂谋泶锞飨韵陆怠F中,附睾头部和体部恢复到假手术组的水平,而附睾尾的表达仍高于假手术组。结论:蛋白和在附睾头部、体部、尾部原代培养上皮中均有表达且表达较稳定,其表达有明显区域性。雄激素对体外和体内附睾上皮蛋白和的表达均有下调作用,且雄激素的调控作用有明显的区域特异性。总之,本研究是对啮齿类动物睾丸与附睾生后发育过程中表达时空规律的状喂鄄斓紾谛∈筘和枭蠓⒂牡炱湎赴ㄎ环⑸斯丶的转变,即从原先定位于精原细胞和早期精母细胞转而定位于圆形精子细胞和部分粗线期精母细胞,