文档介绍：上海交通大学
硕士学位论文
上海地区奶牛乳房炎主要致病菌分析及基因治疗初探
姓名:易明梅
申请学位级别:硕士
专业:预防兽医学
指导教师:朱建国;华修国
20080101
上海交通大学硕士学位论文
上海交通大学
学位论文原创性声明

本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所
取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发
表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确
方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。

学位论文作者签名:易明梅

日期:2008 年 3 月 10 日

- 2 -
上海交通大学硕士学位论文
上海交通大学
学位论文版权使用授权书

本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向
国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权上
海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影
印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。
保密□,在年解密后适用本授权书。
本学位论文属于
不保密√。
(请在以上方框内打“√”)

学位论文作者签名:易明梅指导教师签名:朱建国

日期:2008 年 3 月 10 日日期:2008 年 3 月 10 日

- 3 -
上海交通大学硕士学位论文
上海地区奶牛乳房炎主要致病菌分析及基因治疗初探
摘要
奶牛乳房炎是由物理、化学或微生物等因素刺激奶牛乳腺所引发的一种炎症反应,其中
多种病原微生物的感染是引起奶牛乳房炎的主要病因。该病广泛存在于世界各地,其发生率
至今仍相当高。它不仅仅给世界奶牛养殖业带来了巨大的经济损失,也给乳品工业的发展、
公共卫生以及食品安全带来一定隐患。本研究以上海地区规模化奶牛场乳房炎患牛为实验对
象,分离鉴定出引起奶牛乳房炎的主要病原菌,对这些主要病原菌进行基因分型和耐药性分
析,并探索重组溶菌酶质粒防治奶牛乳房炎的疗效及其对环境的安全性;旨在获得上海地区
奶牛乳房炎病原菌及其药物敏感性的系统资料,为指导临床合理用药和提高奶牛乳房炎防治
效果提供理论依据,也为系统开展奶牛乳房炎致病菌的分子流行病学调查、血清学分型和耐
药性研究奠定基础。主要研究包括以下四个内容:
(1)上海地区奶牛乳房炎主要病原菌的分离鉴定。本实验对从上海郊区四个奶牛场采
集的临床型和隐性乳房炎患牛的 126 份奶样进行细菌培养、分离鉴定,共分离到主要病原菌
107 株,其中金黄色葡萄球菌 74 株,占分离菌株的 %;无乳链球菌 27 株,占分离菌株
的 %;病原菌单独感染率为 %,其中金黄色葡萄球菌的单独感染率达 %;病
原菌混合感染率占 %,多为金黄色葡萄球菌和无乳链球菌混合感染。
(2)引起奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的基因分型。本实验采用 ERIC-PCR 分型方法,
对分离所得的 74 株金黄色葡萄球菌进行了基因分型。结果显示,74 株金黄色葡萄球菌可扩
增出 4~9 条带,共分为 4 个聚类群,亲缘关系相同或相近的菌株占 %。发现在同一牛群
中的分离株可以存在相同的基因型,也可以存在不同的基因型;而不同牛群中的分离株也可
属于同一基因型。这种结果提示,上海地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌多为同一基因
型,在某个或某些牛群中存在 A 类一金黄色葡萄球菌的优势流行株。但不同环境和条件下同
一种病原菌的基因型也存在一定差异,可能存在多个金黄色葡萄球菌的流行株。
(3)上海地区奶牛乳房炎主要病原菌的耐药性分析。本实验根据 NCLS 标准,对分离
所得的 107 株主要病原菌运用琼脂扩散法进行药敏试验。结果显示,主要病原菌对头孢拉定、
环丙沙星、庆大霉素敏感,其中对头孢拉定的敏感性接近 100%;对大多数抗菌素产生了不
- 4 -
上海交通大学硕士学位论文
同程度的耐药性,对氨苄青霉素产生了完全耐药性。
(4)治疗奶牛乳房炎的基因药物(pcDNAKLYZ)在上海地区的疗效及环境释放试验。
为验证该基因药物在大规模推广使用前的疗效和对环境的安全性,按照农业部颁布的《农业
转基因生物安全评价管理办法》要求,选择地处相对偏僻的某奶牛场为试验地,用人溶菌酶
重组质粒 pcDNAKLYZ 分别治疗干乳期和泌乳期患牛。初步试验结果显示,干乳期患牛的治