文档介绍：上海第二医科大学博士学位论文ISS ODN治疗过敏性哮喘的机理研究姓名:吴祖群申请学位级别:博士专业:内科学、呼吸系病指导教师:许以平20040401上洵_第二医科大学博士学位论文中文摘要ISSODN治疗过敏性哮喘的机理研究目的与背景:哮喘是多种炎症细胞和炎症分子参与的气道慢性炎症性疾病,Thl/Th2失衡是导致哮喘发病的主要原因。近年来研究发现,细菌等DNA中含有的非甲基化cpG(或称免疫刺激序列ISS)具有广泛的免疫调节作用,可激活小鼠或人NK细胞、巨噬细胞、树突状细胞等,、,导致IFN—Y的产生,促进机体免疫应答向Thl反应偏移。本实验建立OVA致小鼠哮喘模型,以人工合成的ISSODN及OVA—ISSODN结合体治疗,检测肺部炎症细胞浸润、BALF中炎症细胞总数及分类,机体细胞因子表达,血清OVA特异性IgE,脾细胞增殖情况等,探讨ISSODN治疗哮喘的机理,为其临床应用提供理论基础。材料和方法:(1)以OVA与ISSODN交联制备OVA—ISSODN结合体,透析纯化;(2)多次OVA腹腔注射致敏及随后雾化吸入激发小鼠建立哮喘模型;(3)检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞总数并分类计数;(4)制各小鼠肺组织病理切片,观测肺组织炎症细胞浸润及支气管上皮变化;(5)ELISA检测小鼠血清OVA特异性IgE浓度;(6)ELISA检Nd,、;(7)RT-、、IFN—YmRNA表达水平:(8)RT-PCR检测肺组织及脾细胞核转录因子Tbet、GATA一3mRNA表达水平;(9)MTT法检测脾细胞经OVA刺激后增殖情况;(10)流式细胞仪法计数各组小鼠CD4’CD25+T细胞在脾缅胞所占百分比。结果:(1)—ISSODN结合体分子量较OVA增加20~30kD,无游离ISSODN(2)与对照组小鼠比较,哮喘组小鼠BALF中炎症细胞总数(p<0,001)及嗜酸粒细胞百分比()明显增加,肺组织病理切片也显示明显的支气管收缩、粘液分泌、支气管上皮增生、脱落、炎症细胞浸润,上皮下基底膜明显增厚,平滑肌细胞肥大;哮喘组小鼠OVA特异性IgE较对照组也明显升高(p<);(3)与哮喘组比较,()及嗜酸粒细胞在炎症细胞t海第二医科大学博上学位论文所占百分比均明显降低();(4)肺组织病理切片显示两治疗组小鼠支气管收缩、粘液分泌、上皮增生、脱落,炎症细胞浸润,上皮下基底膜增厚及平滑肌肥大较哮喘组明显减轻;(5)与哮喘组相比,();(6)ISSODN组及OVA—ISSODN组BALF()及脾细胞培养上清液()中IFN—Y较哮喘组明显升高,;(7)与哮喘组相比,(p<),;ISSODN组及OVA—。(芦<),而ISSODN组无明显差异。();(8)ISSODN组肺组织GATA_3mRNA较哮喘组明显降低,。与哮喘组比较,()而T-betmRNA表达水平无明显差异。对于脾细胞T-bet/,();(9)MTT结果显示,();(10)各组小鼠CD4+CD25+T细胞占脾细胞百分比无明显差异。结论:(1)成功制各OVA—ISSODN结合体,~30kD,无游离ISSODN。(2)成功制备OVA致小鼠哮喘模型,表现为BALF中炎症细胞总数及嗜酸粒细胞数升高,支气管收缩、粘液分泌、上皮增生、脱落、炎症细胞浸润,上皮下基底膜明显增厚,平滑肌细胞肥大;血清OVA特异