实验二蛋白质浓度测定.doc

文档介绍：实验二蛋白质浓度测定――双缩脲法
目的要求
学****双缩脲法测定蛋白质的原理和方法。
原理
具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应,因此蛋白质在碱性溶液中,能与Cu2+形成紫红色络合物,颜色深浅与蛋白质浓度呈正比,故可用来测定蛋白质的浓度。
试剂和器材
一、测试样品
⒈标准蛋白溶液
10mg/ml牛血清白蛋白溶液或相同浓度的酪蛋白溶液()。作为标准用的蛋白质要预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,根据其纯度称量、配制成标准溶液。
⒉测试样品液
人(鸭)血清(稀释10倍)。测定其它蛋白样品应稀释适当倍数,使其浓度在标准曲线测试范围内。
二、试剂
双缩脲试剂:(CuSO4·5H2O)溶于15ml蒸馏水,置于100ml容量瓶中,加30ml浓氨水,30ml冰冷的蒸馏水和20ml饱和NaOH溶液,摇匀,室温放置1-2小时,再以蒸馏水定容至100ml后,摇匀,备用。
三、器材
试管、试管架、恒温水浴、752型分光光度计
操作方法
标准曲线的绘制
取6支干试管,按下表操作。
0
1
2
3
4
5
标准蛋白液(ml)
0





蛋白浓度
(mg/ml)
0





蒸馏水
(ml)






双缩脲
(ml)






充分混匀后,室温下(20-25℃)放置30分钟
测A540值
以A540为纵座标,蛋白质浓度为横座标,绘制标准曲线。
二、样品测定
取2支试管,按下表操作。
试管
0
1
血清稀释液(ml)
0
0