文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
改变Smad表达对成纤维细胞生物特性的影响
姓名:王丹茹
申请学位级别:博士
专业:外科学、整复外科学
指导教师:张涤生

⑧’第縄
⑧中文摘要皮肤创面愈合是一个复杂的过程,包括炎症细胞的趋化,局部的生长因子分泌,再上皮化过程,以及基质的沉积。在众多的影响创伤修复的生长因子当中,杂先ü唐鹱胖凉刂匾5淖饔谩Q芯恐な担可以促进成纤维细胞的增殖、细胞外基质的产生,同时抑制胶原的降解。另外,单核细胞、┮蛩囟伎梢源俳:组织的形成。所以,可以通过调节男形@纯刂岂:郏绕涫遣理性瘢痕增生的产生。近来在信号转导领域的研究提示,控制生长因子效应的最佳途径之一就是阻断它们的细胞内信号转导。易宄稍苯藕糯邮芴宕ǖ莞四诎谢颍馐撬堪彼幔瞻彼峒っ甘芴逑掠最主要的信号转导途径。,观察其对成纤维细胞增殖和内源性甗基因表达的影响。第一部分阻断细胞内信号转导对细胞功能的影响目的研究反义一种騍恢諭对瓸基因表的的调控和对细胞增殖的影响。方法全长的反义人騍重组的质粒,通过脂质体榈甲H綨赴每瞻自靥作为对照。用对转染基因、瓸的表达进行检测,同时进行细胞计数以观察细胞增殖的改变。另外,在转染南赴校运用免疫组化技术检测蛋白水平的表达。所有的实验重复三次并用配对煅樽魍臣蒲Х治觥在赴屑觳獾较嘤δ康幕虻谋泶铩被克隆至载体中。将结果上海第二医科太学博士研究生学位论文第
⑧可以通过阻断的细胞内信号转导来调控它的生物学效应。第二部分重组腺病毒的构建及在癜痕疙瘩细胞中的表达构建重组的腺病毒表达载体,以评价用于瘢痕疙瘩基因治疗的方法反义騍的被克隆至载体中。插入片段盖星邢拢苯恿又料俨《綝。通过转染细胞进行包装,包装后的病毒再用氯化铯超速离心进行纯化。用组织块法培养获得瘢痕疙瘩成纤维细胞,然后感染重组腺病毒赴。用觳庀赴心康幕虻谋泶铩正确构建了重组俨《荆⒈荒谇忻该盖屑ê湍康幕重组俨《綝被细胞成功包装并扩增。在瘢痕疙瘩成纤维细胞中,检测到目的基因匆錝或的过度表达。瘢痕疙瘩是一种病理性瘢痕,是困扰整复外科医生的一大难题。我们的研究表明,改变水平的信号转导可以有效抑制成纤维细胞的纤维化表型。同时我们构建了重组的腺病毒表达系统,可用于进一步基因治疗方面的研究。这些研究会为瘢痕疙瘩提供新的治疗策略。反义芟碌鳎⒁种的增殖。在过度表达中,的表达、猵鞍质的表达和细胞增殖都显著下降。结论可行性。被结果腜鉴定所证实。目的蚉甋上海第二医科大学博士研究生学位论文第
⑧英文摘要竐业,甇瑃,—甀甀,
⑧琣琓,猵猵··,,..第
⑧—甊甈..第
⑧言引个涉及多种细胞、细胞外基质和细胞因子的动态交互过程⋯。细胞因子素、干扰素等种类。大量研究证实,和皮肤创伤修复密切相关的生长因子组织的结构和强度,最终接近原有皮肤的结构和功能,这一过程往往会延续到伤后数月。然而,创伤愈合有时会超越再生的范畴,出现病理性的增但是,近二十年来,关于创伤愈合机制方亟的基础研究还是获得了相是指一类由细胞分泌的、能调节靶细胞生物效应的生物活性多肽或蛋白,目前已知包括生长园子、淋巴因子、单核因子、集落刺激因子、白细胞介通透性增高、中性粒细胞和单核细胞等大量炎症细胞的浸润。机体通过炎血管内皮细胞的迁移、增生和分化,以及细胞外基质的合成、分泌和沉积,绕涫呛笳撸创伤修复是外科领域一门古老而基础的科学,从史前文化到现代文明,贯穿着历史的整个进程。随着上个世纪生命科学的迅速发展,特别是分子生物学的进展,人们对创伤修复的探索产生了飞跃,从器官、组织深入到细胞、分子,乃至基因水平。创伤修复的机理得到不断揭示,直接影皮肤的创伤愈合主要涉及上皮组织和结缔组织的再生,其过程通常分为三个阶段⋯。首先,是炎症期,包括创伤局部血液动力学改变、血管症反应局限并消灭损伤因子、同时清除坏死组织而促进修复。其次,是增生期,包括再上皮化和肉芽组织形成,机体通过表皮细胞、成纤维细胞、达到修复目的。伤口收缩也发生在这一阶段,意义在于缩小创面。第三,是重塑期,逐渐成熟的肉芽组织转化为瘢痕组织,其重塑或改构可以调整生,产生过多的瘢痕组织,即增生性瘢痕和瘢痕疙瘩由于其呈持续浸润性生长且不会自行消退,被认为是一种体表的良性肿瘤,在临床上,整复外科医生一直试图寻找有效的防治方法,迄今为止仍当的突破。现代创伤修复观念认为,创伤愈合绝非简单的线性过程,是一响着临床医学的治疗方法,并不断注入着新的理念。未取得令人满意的结果。上海第二医