文档介绍：摘 要
septi。基因家族是在除植物以外广泛存在6,5,参与细胞分裂等重要的细胞内过程的基因家族,并且也发现有些septin基因家族成员与MLL基因融合,导致白血病,提示了它可能与肿瘤发生有关。
≥本衙究克隆了两q-人类septin基因家族的新成员,septin,(gbIAY034176) 和septi”6(gblAY034177)。(克隆的septh7,cDNA序列长为1436 bp,包含一个编码372个氨基酸残基的开放阅读框,它与小鼠septin l的同源性高达94%,组织表达谱分析表明至少存在三种转录本, kb、 kb。
l 3 kb的转录本在肝中表达量最高。克隆septin 6基因的eDNA长度为4697 bp 编码一个427个氨基酸的蛋白,它与小鼠的septin %。Northern 分析表明,该基因存在四个表达情况不同的转录本, kb、 kb、 kb,在人类16种组织中广谱表达。基因组结构分析表明,至少含有10个外显子,定位于人类Xq24。人类septin 2基因编码361个氨基酸的蛋白, 与小鼠septin %,Northern分析表明, kb、 kb。 kb的转录本在人类16种组织中广谱表达。三
~6 35。34种septin家族蛋白的序列分析表明, 在scptin蛋白的中部同源性高,并包括三个保守的基序。用免疫共沉淀的方法证实了肝表达的人类septin家族蛋白自我之间以及相互之间能相互作用。:
Norlhern分析三种septin蛋白基因在肝癌中的表达情况,结果显示,septin 2
和septin 6在肝癌组织中上调表达,提示了它们与肝癌的发生的相关性。
.用人类septin,基因为饵基因筛选到六个互作蛋白,其中两个是septin l和 septin 6,另外4个为PICl、CETIXl、PIASX—BETA及一个未知功能的蛋白 KIAAl 784。用哺乳动物细胞内的免疫共沉淀方法证实septin 1与CETIXl的相互作用。缺失分析表明septin l的二级结构或/和三级结构对它与其他的蛋白结合影响较大。
同时我们还克隆了人类CDV-,基因cDNA(gblAZl39540)及其可变剪接本 CDV-lb(gblAFl39540)。克隆的CDV-1基因cDNA全长为2700 bp,而CDV-Ib 的cDNA为3118 bp,它们编码同一个676个氨基酸的蛋白质。我们也克隆了小鼠的Cdv.,,并纠正了以前发表的序列的两处错误,得到正确的676个氨基酸的编码序列。蛋白质序列比较显示人类CDV一1与小鼠Cdv—I的同源性高迟92%。人类 ,;小
,含有三个coiled—coil序列。用CDV-1基因 cDNA序列与所获得的基因组序列比较,从而确定CDV-1基因的内含子和外显子结构。CDV-1基因至少横跨J00 kb的基因组序列,包含至少19个外显子。 CDV-lb与CD胙,仅在第一外显子的剪接不同,但不影响开放阅读框。在人类 CDI/-,~50 nt处找到一个CpG岛,而在CDV-1基因上游一3096~一3046 存在一个(CA)25的重复序列。根据RH mapping的结果以及基因上找到的两STS 序列,可以将CDV-。Northern分析表明,小鼠Cdv一, 与人类CDV-1基因在睾丸中的表达量比其他组织中高得多。在15-270天龄的大鼠的睾丸组织中,Cdv一,在15天时表达量较低,在第45天时表达量最高。在小鼠的睾丸组织中的原位杂交还显示:小鼠Cdv一,基因仅在精原细胞中表达。研究结果提示,人类CDV-1和小鼠Cdv一,可能参与精原细胞向初级精母细胞发育的
过程。
关键词:!塑克隆一No—rt~hern杂交酵母双杂交墨寞相互作用肝癌相关基
因septin C—D。V一-1原位杂交睾丸功能
Abstract
Septins are members of a highly conserved protein family found in a wide range anism,and participate many inrportant cellular processes such as cytokinesis. The raci that some members of this family we