文档介绍：黄曲霉***的测定
黄曲霉***(Aflatoxins,简写AFT),是黄曲霉、寄生曲霉及温特曲霉等产毒株的代谢产物,是一群结构类似的化合物。目前已发现17种黄曲霉***,根据其在波长为365nm紫外光下呈现不同颜色的荧光而分为B、G二大类,其中B大类在氧化铝薄层板上于紫外光下呈现蓝色荧光,而G大类则呈绿色荧光。
黄曲霉***属剧毒物质,其毒性比***化钾还高,也是目前最强的化学致癌物质。其中AFT B1的毒性和致癌性最强,帮其在食品中允许量各国都有严格规定。
AFT主要污染粮油及其制品,如花生、花生油、玉米、大米、棉籽等被污染严重。
黄曲霉***允许量标准
食品品种允许量标准(ppb或10-6)
玉米、花生、花生油≤20
玉米及花生制品≤20
大米、其他食用油≤10
裱花蛋糕、饼干、面包≤5
婴儿代乳食品不得检出
本章重点
薄层层析法测黄曲霉***
薄层层析是在黄曲霉***研究方面应用最广的分离技术。自1990年,它被列为AOAC(association of official agricultural chemists)标准方法,该方法同时具有定性和定量分析黄曲霉***的功能。
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原理
本法是利用样品中的黄曲霉***B1,经有机溶剂提取、净化、浓缩、薄层分离后,在波长365nm紫外光下产生蓝紫色荧光,根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定黄曲霉***B1的含量。
薄层色谱法黄曲霉*** 4ug,最低检出浓度为5ug/Kg。
仪器
小型粉碎机
样筛
电动振荡器
玻璃浓缩器
玻璃板5cm×20cm、薄层板涂布器
展开槽(25cm×6cm×4cm)
紫外光灯100一125w、波长365nm滤光片、微量注射器
试剂
三***甲烷、正己烷(沸程30~60℃)或石油醚(沸程60~90℃)、甲醇、苯、乙***、无水***或***经无水硫酸钠脱水、***。以上试剂在试验前需先进行空白试验,如不干扰测定即可使用,否则需逐一进行重蒸。
吸附剂--硅胶
薄层层析用硅胶有多种规格。
应用最多的是掺有粘合剂石膏的硅胶,称有硅胶G,其掺入的石膏量为5-20%不等。硅胶有时含有铁盐及***离子等杂质,它们可被展开剂提取出来,对层析的结果产生一定影响。
硅胶H――不含粘合剂和其他添加剂(不会被展开剂提出杂质)。
硅胶HF254 ――掺有荧光指示剂,可在短波254纳米的紫外光下观察到荧光。
硅胶GF254――含石膏及荧光物质。
黄曲霉***B1标准溶液
1、黄曲霉***B1标准贮备液:准确称取1~ AFTB1标准品,先加入2mL乙***溶解后,再用苯稀释至100mL,避光、于冰箱4℃保存。此标准液浓度约为10ug/mL。先用紫外分光光度计测定其浓度,再用苯一乙***。在350nm,AFTB在苯一乙***(98+2)混合液中的摩尔消光系数为19 800 .
2、黄曲霉***B标准使用液:
I液():取1mL AFTB标准液()于10mL容量瓶中,用苯一乙***混合液稀释、定容。
Ⅱ液():取I液1mL,按上法定容5mL。
Ⅲ液():取液Ⅱ1mI。,按上法定容5mI。。
思考:在配制黄曲霉***B标准使用液时,为什么需要用贮备液来稀释而不是直接配制?