文档介绍：关于高压氧保存对离断肢体骨骼肌的影响
研究高压氧保存对离断肢体骨骼肌的保护作用。高压氧保存对离断肢体骨骼肌的影响,其超微结构变化优于室内空气保存的离断肢体。
离断肢体肌肉的保护是否得当直接影响再植肢体成活率及功能恢复。在肢体的所有组织中骨骼肌对缺血、缺氧最为敏感,因此肌组织活力的维持对断肢再植的成功起关键作用并被作为观察指标。肢体再植术后采用高压氧(HBO)治疗已被证实对此有较好效果。H BO能逆转细胞变性,提高再植肢体的成活率〔1〕。但是有关用HBO保存离断肢体的报道甚少〔2,3〕,本实验采用HBO对Pa(表压),洗舱6~8分钟,然后开始加压,, ATA,舱内氧浓度为98%,&plusmn;℃,相对湿度为25%~65% 。稳压预定时间后,开始匀速减压,减压时间为15~20分钟。
3 检测内容
骨骼肌超微结构变化
按各时间组分别取一小块后肢胫前肌,切成1mm1mm3mm的五个组织块,用3%戊二醛固定,1%饿酸进行后固定,经***、***逐级脱水后,用环氧树脂618纵行包埋,超薄切片, 经醋酸钠-柠檬酸钙双重染色后,应用日产JEM-2000EX型透射电镜观察。
骨骼肌Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性测定
按各时间组切开离断的后肢皮肤,钝性分离剔取筋膜及胫神经,切取整块小腿三头肌,立即置入液氮中,待进行酶活性测定时,将肌组织从液氮中取出,称重后加9倍冷生理盐水,并在冰浴中剪碎,用ZS 83-1型内切式组织匀浆器在冰浴状态下进行匀浆。匀浆时间10秒/次,间隙10秒,连续5~8次。取100&mu;l组织匀浆液,按ATP酶试剂盒(南京建成生物工程研究所生产)的使用说明逐步操作,用721-A型分光光度计在660nm处测吸光度A值。蛋白定量:用考马斯亮蓝法参照文献进行〔5〕,酶活性以&mu;--1表示。
4 统计学处理
所有数值均以平均值&plusmn;标准差(&plusmn;s)的形式表示,用第四军医大学卫生统计学教研室《SPLM》软件,进行t检验分析。
结果
1 骨骼肌超微结构的改变
肢体离断后在常温室内空气中保存3小时,可见线粒体肿胀,嵴紊乱,肌原纤维排列尚整齐,Z线扭曲,明带增宽,核染色质已开始凝集,肌质网扩张;而经HBO保持3小时,胞质中线粒体轻度肿胀,肌原纤维排列整齐,明暗带清晰可见,核染色质分布均匀,核仁明显,肌质网轻度扩张。在室内空气中保存6小时的断肢骨骼肌表现为细胞膜下水肿,线粒体明显肿胀并有髓样小体形成,肌质网扩张明显,肌原纤维排列紊乱,部分断裂,核染色质凝集明显( 图1);经HBO保存6小时断肢骨骼肌表现为线粒体肿胀明显、嵴紊乱,肌质网扩张明显,肌原纤维排列较整齐,明带增宽,核染色质分布较匀匀,偶见凝集、边移现象(图2)。室内空气保存9小时,上述超微结构变化程度明显加重,表现为质膜破裂,肌丝断裂、溶解,线粒体肿大、空化,核固缩、溶解等细胞死亡不可逆征象(图3);而经HBO保存9小时,可见线粒体肿大、嵴紊乱,部分肌原纤维排列不整齐,核染色质凝集、边移,直到12小时才可见胞膜破裂,线粒体肿胀空泡化,肌原纤维排列紊乱、溶解,核固缩等征象(图4)。从以上超微结构变化对比,发现断肢骨骼肌在HBO条件下保存明