文档介绍：ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
在实际应用中,具体的方法步骤可有多种:用于检测抗原的双抗体夹心法、用于检测抗体的间接法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是双抗体夹心法及间接法。
目录
双抗体夹心法
竞争法
间接法
捕获法
ABS-ELISA
双抗体夹心法
双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。
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双抗体夹心法原理与操作
加待检标本
37℃ 1h
洗涤3-5次
拍干板子
双抗体夹心法原理与操作
加酶标抗体
37℃ -1h
洗涤3-5次
拍干板子
双抗体夹心法原理与操作
加底物10-30min
颜色变蓝
加终止液
酶标仪检测
避光
双抗体夹心法常见问题
同时加待检标本及酶标抗体
一步法
出现问题:钩状效应
所得结果将低于实际的含量
应注意可测范围的最高值
抗原过量时
双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰。RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应。采用F(ab')或Fab片段作酶结合物的试剂,由于去除了Fc段,从而可消除RF的干扰。
双抗体夹心法常见问题
竞争法测抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。
双抗原夹心法测抗体
本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法。