文档介绍：杂交的目的-----制备单克隆抗体杂交瘤技术的基本原理具有分泌功能的B细胞难以在体外长期存活。利用细胞融合技术,将免疫后的B细胞与在体外能长期存活的骨髓瘤细胞进行融合,经过选择培养获取杂交细胞,这种细胞称为杂交瘤细胞(Hybridoma)。※:该细胞的特点:1、具有免疫B淋巴细胞分泌特异性mAb的功能;2、具有骨髓瘤细胞无限增殖的能力。故应用杂交瘤细胞生产单克隆抗体。杂交瘤技术基本过程示意图HAT选择性培养HAT分别代表次黄嘌呤(hypoxanthine,H)氨基碟呤(aminopterin,A)和胸腺嘧啶(thymidine,T)三种物质。细胞的DNA生物合成有两条途径:,,whicharesuitableforfusion,areofBALB/Corigin,6-8week,-1,,/0hybridomaappeartobesomewhatmoreSensitivethanNS-(PEG)-%to50%.Below30%,thefusionfrequencyislow,andabove50%,、可溶性抗原1wk抗原50μg/只,溶于300μl生理盐水中,加入等量福氏完全佐剂(CFA)充分乳化,分颈、部皮下多点及腹腔注射;3wk抗原的剂量及注射的部位同上,仅将全佐改为半佐(IFA);5wk抗原50μg/只,溶于300μl生理盐水中,腹腔注射;加强融合前3~5天抗原20~30μg/只,溶于50μl生理盐水中,小鼠尾静脉注射以加强免疫。二、细胞抗原1wk细胞数量8×106个/只,洗涤三遍,~,腹腔注射;3wk细胞数量6×106个/只,细胞的预处理及注射的部位同上;5wk细胞数量5×106个/只,细胞的预处理及注射的部位同上;加强融合前的4~5天细胞数量3×106个/只,加强免疫。在以肿瘤细胞作免疫原时,为避免免疫过程中小鼠因生长肿瘤而死亡。故用丝裂霉素处理免疫原细胞,抑制其生长繁殖以防形成肿瘤。最后的加强免疫,肿瘤细胞可不经丝裂霉素处理,因4~5天后即进行融合。免疫脾细胞的制备处死小鼠,固定于解剖架上打开腹腔,取出脾脏。置于120目的钢丝网中,将网移入盛有20ml生理盐水的平皿中,用注射针芯轻轻压磨,使其成为单个细胞悬液,吸取1ml细胞悬液(约5×106细胞),与骨髓瘤细胞SP2/0(5×105细胞)混合,离心后弃上清。※1、骨髓瘤细胞:免疫脾细胞为1:102、一个脾脏可获约108个细胞