文档介绍：渤海海洋沉积物放线菌非培养多样性研究
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专业年级:生物科学2008级
内容提要
1 前言
2 材料与方法
3 实验结果与分析
4 讨论
1、前言
放线菌(Actinomycetes)
一类具有分枝状菌丝体的,高GC含量的革兰氏阳性细菌。
代谢活动活跃,次级代谢产物丰富多样。
海洋放线菌(marine Actinomycetes )
海洋放线菌的分布十分广泛
海洋特殊环境的选择压力造就了海洋放线菌物种及代谢产物的独特性、多样性,所蕴涵的应用潜力不可估量。
渤海简介
近封闭的内海,地处中国大陆东部的最北端,盐度仅为30PSU
近10年来,陆域活动造成的渤海中部海区水质下降和富营养化等环境污染问题正不断引起各方面的高度重视,海区及其周边区域的生态环境正面临着越来越大的压力
渤海北部海域海洋放线菌的研究
在我国,对海洋放线菌的研究已有初步规模。但基本上集中在南方红树林生境、南海以及南北极和部分热泉等特定环境中,而对北部海洋放线菌的研究非常少。
已见报道的为青岛近海和大连、烟台沿岸潮间带中可培养放线菌。
对渤海这一受人为活动影响较大、环境恶劣的区域,海洋放线菌的群落结构、资源、多样性会有什么样的变化,还很少有研究。
2、材料与方法
材料
渤海样品B71-2 采集时间::39地理位置: 120° 38°

渤海样品B37-3 采集时间: 14:03 地理位置: 121° 38°
水深32米下层40cm沉积物
方法
放线菌宏基因组DNA的提取及纯化
周法
试剂盒法
放线菌特异性引物扩增
A-19、S-20
连接转化、构建克隆文库
RFLP
系统进化树构建
多样性分析
分析测序结果
Mothur
EstimateSwin820
Mega
3、实验结果与分析
、总DNA的提取及放线菌特异性序列的扩增
样品B71-2,B37-3的总DNA琼脂糖凝胶电泳检测结果见图1。
B71-2电泳条带比B37-3的条带稍亮,可以看出两个样品中DNA含量都很高
图1:宏基因组DNA电泳检测结果
M: λ-Hind III Marker;1:B71-2 2:B37-3
、两个样品的总DNA用放线菌特异性引物(S-20,A-19)进行扩增,在640 bp处出现目的条带(见图2)。
图2:放线菌特异性引物扩增DNA电泳检测结果
M:Marker D2000 1:对照 2:B37-3 3:B71-2
M 1