文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
基质金属蛋白酶及其抑制剂在人腹膜间皮细胞中的表达研究
姓名:林星辉
申请学位级别:硕士
专业:内科肾脏病学
指导教师:钱家麒

果成功建立了腹透流出液中原代培养人腹膜间皮细胞的培养体着毛厂我们还通过培养人腹膜间皮细胞的培养方法,的一些因素与促进到獾囊恍┮蛩刂涞亩胶馐艿狡苹狄鸬摹目基质金属蛋白酶及其抑制剂在人腹膜间皮细胞中的表达研究/人腹膜间皮细胞培养方法较多,近年来,很多学者通过胰蛋白酶消化组织腹膜透析是治疗慢性肾功能衰竭的重要手段之一,超滤衰竭是阻止长期腹透顺利进行的主要原因,超滤衰竭的发生多伴有腹膜细胞外基质的过度积聚及腹膜纤维化的发生。墓然劭赡苁怯捎诖俳鳨合成前国内外对腹膜纤维化的发病机制尚不明确。基质金属蛋白酶及其抑制剂/騰口荅降解的主要酶系之一。疶谧橹宋械闹匾作用正逐渐引起众多学者的关注,疶低呈欠裼敫鼓は宋慕有关呢壳暗牡难芯可胁幻魅贰J腹膜间皮细胞是腹膜表层主要的细胞群体,直接暴露于高糖高渗等非生物相容性腹透液的刺激作用下,间皮细胞在调节问皮下闹刈榉矫嫫鹬匾作用。研究高糖等非生物相容性因素对人腹膜间皮细胞疶泶锏挠响,探讨可能采取的干预措施,对于深入认识腹膜纤维化的发生机理及其防治措施具有重要的基础及临床意义。法或直接种植法,利用外科手术取材获得的大网膜组织成功培养出原代人腹膜间皮细胞。但是,这种方法是一种有创性的检查,并且大部分标本取自普通胃肠道或肝胆疾病手术病人,而非尿毒症病人,二者腹膜所处的环境有明显的不同,有学者对这种方法所培养的腹膜间皮细胞是否能够代表病人的腹膜问皮细胞提出了异议。为了解病人腹膜形态包括腹膜间皮层的变化,不少学者利用病人腹膜活检的标本获得这方面有益的信息,这种有创性的检膜透析阶段病人的标本。基于上述获取尿毒症不同腹腹透流出液中原代我们通过改进,结应用扫描电镜动态观察不同腹透龄培养的腹膜间皮细胞其形态学上的差异,探求通过这种针对某一具体病人的个体化的培养方法间接地判断腹透病人体内腹查由于取材过少不能用于腹膜间皮摘要上海第二医科大学硕士学位论文/、、
作用。恸:研究共分两部分,主要内容及结果如下:膜间皮层的实际情况。然后研究了、、在人腹膜间皮细胞上的基因及蛋白表达,以及高糖、高渗等非生物相容性因素对上述物质基因表达的影响,以期阐明疶诟鼓は宋构讨锌赡芷鸬一、腹透流出液中原代培养人腹膜间皮细胞及其临床意义利用病人腹透流出液标本,采用离心的方法原代培养人腹膜间皮细胞并进行传代,利用相差显微镜,免疫组化鉴定,并应用扫描电镜动态观察不同腹透龄培养的腹膜间皮细胞形态学上的差异。结果成功地利用腹透流出液原代培养出人腹膜间皮细胞并顺利传代,细胞汇合后呈多边形,形成铺路石样外观。当培养液中加入螅赴翁硐为一种可逆性的成纤维样改变。免疫组化显示培养的间皮细胞胞浆角蛋白及波形蛋白表达均呈阳性,白细胞抗原表达阴性。扫描电镜动态观察不同腹透龄培养的问皮细胞,其形态学上存在一定的差异:所有培养的间皮细胞几乎均可见到长短不~的微绒毛,微绒毛形态大多表现为丝状的,也有部分呈球状表现;但腹透龄在一年以上的,所培养的间皮细胞微绒毛最为稀少甚至接近消失,并且间皮细胞生长缓慢,培养瓶中呈胞体增大的“大间皮细胞”较多。我们的研究证实从腹透流出液中原代培养人腹膜间皮细胞是一种行之有效,取材方便,方法简便,重复性高,无创性的培养方法。这种方式培养的腹膜间皮细胞与利用大网膜培养的腹膜间皮细胞相比,其形态及功能更接近于腹透病人的腹膜间皮细胞,一定程度上反映病人体内腹膜闯皮层的实际情况,这为体外研究人腹膜间皮细胞的形态及功能及其腹透时的改变提供了必要的物质基础,并有可能成为临床随访的一个有力工具。二、人腹膜间皮细胞基质金属蛋白酶及其抑制剂表达研究利用腹透流出液原代培养人腹膜问皮细胞并进行传代,采用、免疫组化及法检测人腹膜问皮细胞、、基因及蛋白表达,并研究高糖高渗对人腹膜间皮细胞上述物质基因表达的影响。结果显示,人腹膜间皮细胞存在、基因及蛋白表达,未发现明显的表达,テ咸烟窍灾系魅烁鼓ぜ淦は赴鸗基因上海第二医科大学硕士学位论文
腹硝呱约淦は赴鸗基因表达无明显影响,高糖、高渗对人腹膜间皮细胞、虮泶镂廾飨杂跋臁觳馓崾救烁膜问皮细胞持续分泌并具有降解明胶的功能,金属螯合剂能够抑制间皮细胞所分泌的活化。厂我们的研究提示人腹膜间皮细胞能够通过疶低秤跋斓礁鼓慕到猓咛强赡芡ü盏技淦は赴鸗与浔泶锸Ш猓诖俳腹膜纤维化的进展上起一定作用。研究生物相容性更好的不含糖腹透液,延长腹透时间,在临床上具有重要的意义。金属蛋白酶组织抑制剂间皮细胞透析原代培养表达伊关键词:基质金属蛋白酶高糖高渗上海第二医科大学硬士学位论文,、
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