文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
精子冻融损伤机理及其防护的初步研究
姓名:曹文雷
申请学位级别:博士
专业:外科学(泌尿外科)
指导教师:王益鑫
精子冻融损伤机理及其防护的初步研究中文摘要第一部分:精液冻融过程对于精子形态及功能的影响生育力的男性,运用精液自动分析系统对冻融前后精子的运动轨迹变化进行观察,将冻冻融前后的精子做成切片,置于透射电镜下观察精子的超微结构改变。的部分精子功能指标。通过改良低渗肿胀试验比较了冻融前后精予头膜与精子尾膜的完第二部分:精子冻融损伤相关蛋白在精液冻融前后的改变及意义冻融前后精子热休克蛋白谋浼捌溆刖踊疃实墓叵怠S醒д热休克蛋白在人精子中的定位及其冻融前后变化。,其结构和功能均出现了明显的变化,但目前我们对精子冻融损伤的机理仍不十分清楚。本研究观察了冻融前后精子的形态和功能改变,对于这些改变,我们从蛋白质是细胞实现功能的根本载体这一角度,研究了冻融前后精子蛋白质的变化。以明确冻融前后,精子蛋白质是否存在变化悄男┑鞍字史⑸吮浠蛋白质变化与精子冻融前后变化之间的联系,蛋白质变化的机理是什么硗猓颐腔固教至瞬煌炒方法对于精子活动率以及精子蛋白质的影响。方法冻融前后精子运动特征及形态学的变化。样品来自名正常供精者及已证明有融后的精予涂片后进行巴氏染色,在普通光学显微镜下观察精予的形态学改变。最后将冻融前后精子膜完整性和顶体酶活性的变化。观察了份精液样品在冻融前后整性,另外通过明胶底物法比较了冻融前后精子顶体酶活性的改变。报道在冻融前后的家猪精子中存在降南陆担颐峭ü湫跃郾0纺电泳以及免疫印迹技术⒘:狭送枷穹治黾际醵垦芯人精子的皆诙橙诤笫欠翊嬖谙陆担硗馕颐腔贡冉狭硕橙诠痰牟煌倍危精子接刖踊疃手涞南嗷ス叵怠可以定位谌司又械奈恢茫颐腔雇ü眉际趿:嫌τ猛枷穹治黾际醵糠热休克蛋白与精子活动率相互关系的初步研究。在菥貉分校吹于精子活动率的影响,另外部分样品中加入咖啡因,观察咖啡因对于格尔德霉素的效应有无逆转作用。上海第二医科大学级博士研究生论文
冻融前后精子较陆祷淼某醪窖芯俊Mü。透射电镜的结果显示:冻融后质膜不比较冻融前后精浆中的欠裼猩撸苑治龆橙诤缶親是否从精子中泄漏至精浆中。通过分析精子是否还存在膍硗饣贡冉狭硕橙前后精子水平的变化。应用双向电泳分析精子冻融前后蛋白改变的初步研究。借助双向电泳的高精度,高通量,来源于同一个人的冻融前后精子样品经样品溶解液溶解,并以等电聚焦作为第一向电泳,,凝胶银染后进行比较,以分析除了酝猓欠窕褂衅渌鞍字实改变,以及改变的信息。第三部分:对精子冻融损伤防护的初步研究不同冻融速度对于精子活动率及康挠跋臁2扇≈苯佣炒娣ê统绦蚪温法冻存精子,比较两种冻存速度对于精子活动率和前向运动能力的影响,并通过甈蚖,联合应用图像分析技术比较冻融前后精子乃健观察不同冻融速度对降挠跋臁不同冷冻保护剂对精子冷冻保护的效果比较。分别应用自制的卵黄、柠檬酸盐冷冻保护剂牍馍唐坊涠潮;ぜD行缘木航欣冻保存。样品均采用程序降温仪降温。冻存精子复苏后,比较两组精子的活动率、活力以及复苏率改变,以比较它们对精子的保护效果。结果冻融前后精子的平均活动率从%下降到%,而精子活力指标也发生了类似的变化,如毒诱季莸钠骄壤泊ハ陆档ィ臣品治鱿允径橙谇殊精予运动参数,如平均路径速度⒅毕咚俣、曲线速度筒摆幅值诙橙诤缶鱿置飨缘南陆,.T谄胀ü饩迪碌木有翁Х完整,精子顶体内外膜断裂,内容物外泄,精子核呈空泡样改变,核质不均一,线粒体嵴间隙增宽,透亮度增加。与冻融前精子相比,冻融后精子的头部膜完整性和尾部膜完整性均出现明显的下降。在精子顶体酶活性试验中,总共计数精子个,其中冻融前觯冻融后觥6橙谇熬硬位反笮『筒位返谋壤直鹞..ィ橙诤缶璨位反笮『筒位返谋壤直鹞.%,
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