文档介绍：HifectinIII寡聚核苷酸真核细胞转染试剂C1515描述:对于质粒DNA转染来说,通常是小分子脂质体包裹大分子DNA,形成的复合物表面有一层带正电荷的磷脂层,能以有效进入细胞。但是,由于短链DNA、反义寡聚核苷酸、或小RN***断通常明显小于普通的脂质体颗粒,因而难以被脂质体有效包裹,相反甚至是小DNA或小RNA结合在脂质体表面,因而难以被有效转染。HifectinIII是一种特殊的阳离子脂质体,专用于短的双链DN***断、单链(反义)寡聚核苷酸、siRN***段的真核细胞转染。这种特殊的脂质体经过特别程序制备处理后,能非常有效地包裹小DNA或小RNA颗粒,形成带正电荷表层的稳定复合物,进而高效转染进入真核细胞。其转染高效、细胞谱广、低毒、可靠。规格:,,1ml转染40个24孔板储存:4ºC储存12个月。切勿冻存。适用:短双链DN***断、寡聚核苷酸单链、siRN***段转染,适用多种传代或原代细胞。细胞准备:-2´105细胞于24孔板内,加1ml正常培养基培养。在光镜下观察细胞,当细胞群覆盖培养瓶皿生长表面的85-95%时,为HifectinIII转染的最佳时机。这通常需要18-24小时,但依细胞类型和量而变。传代数过多的细胞,或100%长满的细胞转化效率明显降低。小DNA溶液准备:转染前取出小DNA或小RNA储存液,用灭菌生理盐水或无血清无抗生素培养基,µg/ml。切记,此处较低的稀释浓度是必要的,将保证后续步骤的转染混合物具有适宜的体积以及比例,对转染试剂进行必要且适宜的稀释,进而保证形成有效的转染混合物。建议不可随意改变推荐的终浓度。制备转染复合物:按照1:10的体积比例,取4µlHifectinIII,加入到40µl小DNA溶液(µg/µl)中,注意加样顺序不要反过来将DNA加到转染试剂中。混合均匀,置旋涡振荡器剧烈振荡。室温放置15分钟。然后将44µl转染复合物加入到956µl无血清培养基,总体积1ml,将用于细胞转染。表1列出每孔细胞数和所需转染液的体积,据此计算需要配制的转染液的总量。考虑到移液损失,实际上要多配制一些,例如一个24孔板可按照26~28孔的量来配制。表2列出具体的加样量,初始加样量参考表2的黑体栏,随后可根据细胞毒性和转染效率,加量减量进行优化。最终与细胞接触的HifectinIII不应超过8µl/ml,小DNA浓度应小于6µg/ml,否则将导致细胞毒降低转染效率。表1培养皿、细胞数和转染终体积培养皿面积cm2细胞数转染终体积96-´-well15´-well