文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
皮质酮诱导Leydig细胞凋亡机制的研究
姓名:游海燕
申请学位级别:硕士
专业:生物化学及分子生物学
指导教师:高惠宝

皮质酮诱导细胞凋亡机制的研究中文摘要超生理剂量的糖皮质激素笫筇迥谖Fぶ释能诱导细胞凋亡。但有关皮质酮诱导细胞凋亡的细胞内机制尚不清楚。本研究旨在观察皮质酮是否经疐揪都癱一せ钣盏糒赴蛲觥4送猓杂泄叵吡双标记并经流式细胞仪分析和那碇堑缬玖街址椒ǎ直鸸鄄炀ぶ释仪分析及缬鞠允荆壕ぶ释4、对照相比有显著差异且其基因组牡缬就计壮氏痔葑刺醮T诿魅烦砑细胞凋亡机制的研究。分别采用和免疫荧光染色的方法,检测在不同时间点上经皮质酮处理大鼠细胞中鞍妆泶锴榭觯检测不同时间点上细胞中酶原、裂解的蛋白表达情况。采用的酶荧光发光测定法,检测经皮质酮处理大鼠细胞中富钚裕徊捎昧魇较赴牵觳獠煌奔涞闵螸赴南吡L蹇膜电位及活性氧水平;采用的方法,检测经皮质酮处理大鼠细胞中蛋白表达情况;采用薄层层析结合放射自显影方法,检测不同时间点上细胞中神经酰胺水平。和免疫荧光染色显示出一致的结果:鞍妆泶锼皆谄ぶ释4笨J忌仙时最为显著;也出现上述类似结果,即蛋白表达水平在皮质酮处理时开始上升,弊钗O灾鞍酌冈泶锼酵谄ぶ释4笨J忌仙及北泶量下降,而具有生物活性的裂解的蛋白于背鱿郑表达水平最为显著;酶活性在皮质酮处理庇攵哉障啾纫嘤胁钜欤时最体及神经酰胺是否涉及这一过程也作一初步评价。首先采用猇处理不同时间组大鼠细胞的凋亡率及其基因组牡缬就计住A魇较赴螅琇赴蛲雎视量的皮质酮确能诱导大鼠细胞凋亡的基础上,我们进行有关皮质酮诱导为显著,諲齐狢对、碜榈腸一富钚
关键词:经皮质酮处理的各实验组及对照组其细胞中均无鞍椎谋泶铩I窬酰胺水平在皮质酮处理时即开始上升,时最为显著。本研究结果提示:皮质酮诱导细胞的凋亡过程是经疐揪督榈疾橛衏一募せ过程,其中还可能有线粒体及第二信使神经酰胺的参与,鯞蛋白不涉及该均具有抑制作用,抑制剂能抑制细胞基因组狭眩幌吡L蹇缒さ位在皮质酮处理时即开始降低,线粒体内皆谄ぶ释4笨J荚黾印皮质酮胞线粒体凋亡过程。神经酰胺皮质酮诱导细胞凋亡机制的研究凋亡中文摘要
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前言细胞利用血胆固醇或乙酸盐,在其细胞器滑面内质网、线粒体中,经过复杂的过程合成睾酮。经典的观点认为,细胞合成和分泌睾酮的功能受下丘脑一腺垂体一睾丸轴的调控,其中腺垂体分泌的黄体生成素是调节长期处于紧张、焦虑等应激状态,或长期应用糖皮质激素的男性以及患痵征或低血糖的男性患者,其血浆糖皮质激素水平常呈明显升高,并伴有血浆睾酮含量降低,甚至生育力低下,但个体的分泌量在正常范围。动物实验同样显示,处于应激状态的雄性大鼠其血浆皮质酮笫筇迥诘奶瞧ぶ始に水平明显升高,而血浆睾酮浓度显著降低。近年来的研究发现,糖皮质激素能抑制细胞中睾酮合成,其机制是直接抑制细胞中睾酮合成酶的活性及其的表达,导致细胞合成睾酮的能力降低,这一过程不依赖的变化“。。我们新近的研究结果表明“。:超生降低睾酮合成量。但有关皮质酮诱导细胞凋亡的机制尚不清楚。对凋亡的认识,最早来自秀丽隐杆线虫的研究。细胞凋亡是一在进化上高度保守的,由于细胞内外环境变化或因死亡信号触发而导致的且在基因调控下进行的细胞主动死亡过程,是细胞的自稳平衡机制,借助“细胞丢失、正常细胞更新、往往呈现出一些特征性变化,如细胞膜中某一磷脂成分移至膜的外侧面、细胞膜目前认为:易切割位点在底物陌腚装彼岬鞍酌咐在细胞凋亡发生中作为重要的效应子参与凋亡的过程。多数以无活性的的酶原雄性体内的雄激素主要由细胞和柚械囊恢旨渲氏赴合成和分泌。细胞合成和分泌睾酮的主要激素。理剂量皮质酮亦可通过诱导细胞凋亡,减少睾丸中细胞数量,最终病理情况下清除异常或非法身份”来维持细胞的生理平衡。细胞凋亡可经死亡受体途径或/及线粒体途径发生。无论经哪种途径,凋亡的细胞在形态及生化方面发泡、内质网扩张、核膜皱缩、核固缩、细胞核狭训取形式存在,在行将凋亡的细胞中,酶原被切割后释出大亚基—胄⊙腔皮质酮诱导细胞凋亡机制的研究
,然后形成具有酶活性的四聚体形式,其催化活性位于大亚在凋亡的执行阶段可进一步酶解大量的和凋亡发生有关的蛋白类底物。已有的研典型的死亡受体是也称为或蚑。激活这些受体的配体属于参与的死亡受体途径是:隖岷虾螅油返鞍捉榈肌⒓读猚凋亡过程。已有的研究表明:睾丸间质中仅细胞表达及薄!线死亡信号作用于细胞后,可出现线粒体跨膜电位鞒浮降低、细胞色素猚饬饕灾潞粑炊狭巡⒌贾禄钚匝过量生成等一系列诱蛋白在进化过程中高度保守,功能也相对保守,它可作用于线粒体途径,而抑制