文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
人端粒酶反义寡聚核苷酸对胃癌细胞生长的抑制
姓名:叶静
申请学位级别:硕士
专业:内科学(消化系病学)
指导教师:吴云林;谢弘

入端粒酶反义寡聚核苷酸对胃癌细胞生长的抑制中文摘要胃癌细胞的表达情况。进一步研究入端粒酶反义寡聚核瞽酸制作媚,诱导霹癌细胞凋亡的可能性及其机制,探讨端粒酶反义制胃癌细胞生长的主要机制是抑制端粒酶活性和诱导胃癌细脆量检测方法,运用该方法测定三耪不同分化程度的胃癌细胞定的端粒酶反义寡聚核替酸片段,在指定的作用时间和浓度等条港瘸是我凰最常见的恶性肿瘤之一,羁癌组织中端粒酶活性蜷粒酶为靶点的肿瘤治疗学研究可能成为遐瘿治疗的有效途径。盟反义核酸对鼹癌细胞生长有抑制作用,进顽证明该反义核酸抑一、一亩肆C富钚员泶锴榭觯患桃蕴高表达,而正常胃黏膜组织中端粒酶活性基本不表达。因此,以对三种不同分化程度的潜癌细脆端粒酶活性及生长的抑寡聚核替酸的抑制作用与胃癌细胞的分化程度间的关系;意在阐胃癌治疗的新方法。【方法】建立改良的胃癌细脆端粒酶活性定耀亡,为端粒酶抑制剂治疗胃癌提供实验基础和研究依据,探索件下作用于三种胃癌细胞,运用改筵的霄癌细施端粒酶活‘陛定遗【目的】建立改良的端粒酶活性定量稔测方法,并以三种不同分化程度的器癌细胞为研究裂象,研究端粒酶瓣性在不周分化零呈度的,上海辩二鞍裂太学级霰±毕盈谂文
的端粒酶反义核酸连续作用三种胃瘸细脆螅擞霉饩怠⒐亡情况。【结果】三种不同分化程度的泻癌细胞均有端粒酶活性关系跋⑼寥胛赴┳橹灿卸肆C富钚员泶铮H胛葛酶反义核酸作用后,细胞活率曲线斜率下降最明显。端粒酶反义镜和ḿ觳饩⑾朱袾一和胃癌细胞表现出特跑的凋亡率在。ュ喝ィ硪逍蛄卸哉兆樵蛭廾飨员浠仕得鞫肆C篙诓婧怂崧从盏糓一稀端粒酶活性;用台盼蓝染色法观察胃癌细胞的活力;用倒置显微的表达,但其活性憋离低与这三种胃癌缨胞的分化程度没有显簧膜组织的端粒酶活性为盟性。在指定的浓度下,端粒酶反义核酸作用于胃癌细胞后,和胃癌细胞出现明显的端粒酶活性和生长的抑制,但丧同样浓度条件下胃癌细胞只出现端粒酶活性的抑制。铬义序列对照组鲻无明显变化,尹缎∥上在搀定浓度范围内,随着作用浓度的升高,反义核核酸作用舭┫赴的”浓度分剐为和螅琒感氐纳で榭觯な邓孀抛饔檬奔涞捻测方法测定端粒酶反义寡聚核营酸片段作爆翦后胃癌细胞的镜、电镜、沆式缨胞仪和原位末端标记ü鄄煊П锏和笥摇T谥付ㄅǘ认拢聿舛吮置阜匆搴怂嶙饔延长,反义核酸对爨癌细胞的生长抑制越明显。以有的凋亡征象,流式细胞仪检测证实和赴┧酸对装┫赴纳ひ种圃矫飨浴唆点海第二联辫走学辭锾顿±毕监论文
端粒酶反义寡聚核蒈酸核酸对端粒酶活性的抑制要比对细脆生长的抑制趸敏感,两种揶孛分化缨胞的作用略强于低分化细胞,提承端粒酶反义核酸对胃【结论】三种胃癌细胞均表达端粒酶活性,说明端粒酶活性对于霹癌馥诊断萃瑟治疗有重要价傻,端糍酶活性在三种不月分化程度没有显著摆关性。端粒酶反义寡聚核替酸能抑制羁癌缨胞的生长,其抑制作用是浓度、时间依赖性和序列特异性的,英作用机誊清峁种贫肆C富钚岳暧盏枷赴蛲龊迪值摹6肆C阜匆制作用并不完全乎行。端粒酶反义核酸能有效抑制低、中分化胃癌细胞的生长,但不能有效抑制高分化胃癌细胞的生长,且抑制关键词胃癌细胞端粒酶活性细胞凋亡瘰细胞攫亡。同样作用条件下,缨胞来出现明显凋亡征象。的胃癌细胞中表达基本相近,。』二海笨二藩辩夫攀锻疆士挚遵谂交
——一:笪塑兰@加克刻觅畿琈,/瑃..玶一瑃。。、産.,
~——:型鬯驻黧篓壁萋岳膇秔,.%胏。.琣猘瑂甌￡,,痶’。豷
一5诙拼笱锻胧勘弦德畚
第一部分霉癌缨胞豹端羧酶漏性定量捻测方法豹建立端粒及端靛酶’斌复涮不整垒导数端粒鬟端糖酶是一釉特殊的§>酆厦福秘蛋白瓒两酃分缎嫒终迷人永生纯。近年采,大鬟肓芯烤な担颂逵О谐孳端粒是~段篷予粪核细臆染色体末端的重复序捌,它熊防染色体在棱酸酶的髂穗下发生晦解、鬟缓竣靖端融合,越耪维持染色疚榷ò陒萋鲻;溃粒逐参与转录复潮基因,调控疆嚣细胞麴宿丝分裂等鬟簧生命活动。研究发现,线形染色簿存程赣束漆笺制阅题,即在染魍露复铡过程串,随从链柬端的一段蛄胁宦幢桓翠蹋率棺哟鶧郝较筵索代J的溃粒重复序捌。这种在缨胞连续增薅弼魏中,因疆扶链复序捌丢失的现象,袋菠常钵纲胞在隽旁鎏R苫蟪龉迥惫死亡,因此端粮的妖嶷被认为最缨鼹膏壁分裂黪时钟。耨端黻酶,能合成凝的重复净剜添热到染龟体的耍ざ唆伲⒎止端粒进一步缺必“’。成,它能以舀身l搴铣商囟ㄥ珞判蝌露添姐翻染彀侮末端,使端粒维持在一定长度,纲臆得以持绥分裂,生疆细耱、遣斑于