文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
生存素基因突变体诱导胃癌细胞凋亡的实验研究
姓名:谭继宏
申请学位级别:博士
专业:内科(消化系病)
指导教师:谭继宏

生存素基因突变体诱导胃癌细胞凋亡和有丝分裂危象的实验研究、免疫组化等方法检测胃癌细胞中生存素色素头潘降谋浠涣魇较赴呛瓦灌こ热旧ḿ觳馕赴┫赴和六株胃癌细胞株中均有不同程度生存素基因表达。瞬时转染质粒结果显示,与空白对照和小时后,随着时间生存素基因在胃癌组织中具有高水平表达,而在我们通过基因重组构建生存素基因突变体柿#⒁灾侍遄H镜姆椒ń柿转入胃癌细胞株,观察其对胃癌细胞的生物学特性及多药耐药性的影响。方法本研究应用基因工程技术重组构建生存素基因及其突变体亡,免疫荧光检测有丝分裂危象。结果经基因测序验证重组构建生存素基因和生存素基因突变体成功。通过免疫组化检测显示在例不同分化程度的胃癌组织中,有例存在生存素阳性表达%有嫠匾跣员泶铮胝N刚衬ぷ橹幸谎T诓煌只潭的胃癌组织中,生存素表达程度也有所不同,其中低分化腺癌空质粒对照组相比较,转染的延长,胃癌细胞存活数量逐渐减少,凋亡细胞百分比和剂量和时间中文摘要目的正常胃粘膜中没有表达。生存索表达的水平与胃癌的预后密切相关。、活性变化、裂解和细胞阳性表达,中分化腺癌%表达,而高分化腺癌表达最低,为.%。.、.、
粒后,我们通过免疫荧光检测发现胃癌细胞中有异常细胞核出现。将即退出有丝分裂过程,故有染色体桥联等异常染色体形成。而且,┫赴鱿许多细胞核异常表现,如多个细胞核、分叶状细胞核和巨型细胞核等。呈正比。染色结果显示,ü庀晕⒕迪鲁氏殖鱿灾牡蛲鱿赴形态,细胞质和细胞核萎缩,染色质浓缩和片段化形态。流式细胞仪检测结果显示瞬时转染质粒结果显示,可以诱导胃癌细胞.、,出现较为明显的“亚二倍体“凋亡峰,并且位于/诘南赴棵飨栽黾樱鳶期的细胞数量明显下降。.峁允舅彩弊H綜螅赴┫。因此,过度表达的蛋白可能通过干扰野生型生存素的功能,从而诱导胃癌细胞发生凋亡。通过抑制野生型生存素基因的功能诱导胃癌细胞凋亡,增加钚院痛俳赴谻的释放。转染胃癌细胞后,联合和瘟疲赴┫。转染质转染质粒后,由于细胞动力学障碍导致染色体分离不完全制生存素基因功能也导致胃癌细胞发生有丝分裂障碍而死亡。用广谱素基因表达明显增强。显示,在和
,,故抑制生存素基因引起的有丝分裂危象可能与细胞凋亡的发生无关。结论我们在体外试验中证实有丝分裂危象,并增加胃癌细胞对化疗药物的敏感性,为将来以生存素作为靶基因进一步研究胃癌治疗的新的方法提供了一种可能的选择。有可能成为胃癌治疗的一个候选基因。关键词:生存素突变体细胞凋亡有丝分裂危象了应用抑制生存素基因表达可以诱导胃癌细胞发生凋亡和
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基因,而在正常胃粘膜中则没有生存素基因表达,且生存素的表达水平与胃癌患者的预后呈负相关】。本研究将对生存素基因突变体诱导胃癌细胞凋亡的机制进行探索,探讨胃癌基因治疗的可能途径。对化疗药物更加敏感【】;,使肿瘤细胞对化疗药物的敏感性增加!3酥猓嫠鼗蛟细胞分裂的过程中也具有重要的调节作用【怠Mü匆骞押塑账嵋种的研究显示有丝分裂障碍在临床肿瘤治疗中具有非常重要的意义【药现象,所以预后常不佳。近期研究显示约%的胃癌表达生存素生存素基因突变体诱导胃癌细胞凋亡的实验研究、、等许多刺激因子诱发的细胞凋亡,。已经成为肿瘤治疗研究中的一个靶基因和肿瘤预后有关的标志酸转入肿瘤细胞可以促进肿瘤细胞发生凋亡,并且使得某些肿瘤细胞胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,因其早期转移倾向和多药耐细胞增殖的增加和细胞凋亡的减少都可以是肿瘤发生的原因【T谙赴劳鐾揪吨械牡鹘谝斐?赡艿贾轮琢龅姆⑸⑶铱梢影响肿瘤病人的预后或者导致肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性I家族的成员,定位于人类染色体的延械难芯勘ǖ老示,生存素基因在许多肿瘤组织中均有高水平的表达,但是在正常的成人组织细胞中几乎没有表达【摇俊9缺泶锏纳嫠鼗蚩梢砸种近来,通过对选择性表达生存素基因的小鼠角质上皮细胞的研究发现,生存素基因可以选择性抑制依赖的内源性细胞凋亡途由于生存素基因在肿瘤组织中特异性的高表达,目前生存素基因以往的研究