文档介绍：遗传学实验报告
栀子花开
5219751086
生物有志班
梦想实验学院
实验1 植物有丝分裂染色体制备
一、实验目的
主要掌握有丝分裂染色体制片技术;了解有丝分裂各个时期染色体的特征。
二、实验原理
各种生长旺盛的植物组织,如根尖、茎尖、愈伤组织等常进行着活跃的细胞分裂。通过对材料进行适当的固定处理,酶解和染色,就可以在显微镜下观察到细胞内染色体的变化过程。
有丝分裂中期的染色体长度较短,具有典型的形态特征,易于记数和分析。因此,在细胞的分裂过程中,进行药物或冰冻处理,可阻止纺锤体的形成,使细胞分裂停止在中期。同时,对组织细胞进行酸性水解或酶解处理,降解细胞之间的果胶质和细胞的纤维素壁,使细胞易于散开。
三、实验材料、器具及试剂
大麦、玉米及洋葱等根尖。
显微镜、水浴锅、镊子、载玻片、盖玻片、小瓶、酒精灯、滤纸等。
固定液:95%乙醇:冰醋酸=3:1;染液:***改良品红;处理液:-羟基喹林水溶液, KCl;酶解液:%%果胶酶水溶液。
四、实验步骤
步骤1:
1、浸种催芽:取少许种子放入培养皿中,加水浸没,于30℃左右浸种1-2天。当种子萌动时,把水倒去,在铺有湿滤纸的培养皿中催芽。
2、预处理:-,-羟基喹林水溶液中处理;18℃,1-。
3、前低渗:吸去预处理液, KCl,或水低渗处理10-30min。
4、固定:用95%乙醇:冰醋酸=3:1固定30min以上,也可固定后放入4℃冰箱保存。水洗3次,每次10min。
5、酶解:%%果胶酶水溶液,在37℃酶解处理70-120min(根据软化程度而定)。
6、后低渗:倒去酶液后用蒸馏水冲洗2-3次,在水中停留30min以上,即可直接用于制片。也可换入固定液保存。
7、火焰干燥制片:放2-3个根尖在载片上,加一小滴固定液,用镊子将根尖敲碎至浆状。再滴2-3滴固定液,迅速用镊子夹住载片在酒精灯火焰上加热至着火,然后吹灭火焰。载片在空气中自然干燥。
8、染色:Giemsa染色液染色,1-3h。自来水冲洗,晾干。
步骤2:(本实验内容)
1、浸种催芽:取少许种子放入培养皿中,加水浸没,于30℃左右浸种1-2天。当种子萌动时,把水倒去,在铺有湿滤纸的培养皿中催芽。
2、预处理:-,-羟基喹林水溶液中处理;18℃,1-。
3、前低渗:吸去预处理液, KCl,或水低渗处理10-30min。
4、固定:用95%乙醇:冰醋酸=3:1固定30min以上,也可固定后放入4℃冰箱保存。水洗3次,每次10min。
5、酶解:%%果胶酶水溶液,在37℃酶解处理70-120min(根据软化程度而定)。
6、后低渗:倒去酶液后用蒸馏水冲洗2-3次,在水中停留30min以上,即可直接用于制片。也可换入固定液保存。
7、切去根冠,后取根尖1-2mm,加入一小滴染色剂,用镊子将根尖敲碎至浆状。染色10-15分钟。
8、染色完成后,盖上干净的盖片,并覆一层滤纸。将片子放在实验台上,用大拇指用力压住,并横向揉几次,(注意不要使盖片移动,用力和揉动是一个方向,不能来回揉。)挤压出多余染液,然后置于显微镜下观察(先10x,找到分裂相后,40x观察记录)。
五、作业
1、制备分散良好的染色体制片。
2、绘出有丝分裂各时期的简图(中、后期)。
解:有丝分裂各时期简图如是:
后期
中期
末期
如图中标示,染色体整齐排列在赤道板上的是有丝分裂中期的细胞,而染色体趋向于细胞两极,并有纺锤体牵引的是分裂后期的细胞,染色体完全分布在细胞两极,并中间可见模糊的凹陷即为末期分裂细胞。
,取材是关键步骤,去掉顶端1mm的根尖,取下方2mm左右的位置,进行切割,会利于后续有丝分裂的全过程观察,若是取材过于靠下,会取到伸长区的细胞,就无法观察有丝分裂现象,造成实验失败。
—15min中内,过短着色过浅,过长则不利于观察细胞有丝分裂各时期。
,要进行压片处理,用大拇指横向压几下,在用解剖针的背面轻击使细胞均匀分散,避免盖玻片移动,否则会使得分散的染色体聚集或者破坏染色体排布情况。
由于操作不甚熟练,所以实验重复了两次,不过最终取得了较满意的结果。
实验2  植物减数分裂染色体制片与观察
一、实验目的
掌握花粉母细胞染色体制片技术;
了解减数分裂过程中染色体的变化特征。
增强对植物细胞减数分裂的感性认识,进一步加深对减数分裂的理解