文档介绍：第 10 卷第 3 期过程工程学报
2010 年 6 月 The Chinese Journal of Process Engineering June 2010
烟酸羟基化酶产生菌的快速筛选及催化条件
罗晖 1, 冀春苗 1,2, 常雁红 2, 周北海 2

(1. 北京科技大学生物科学与技术系,北京 100083;2. 北京科技大学环境工程系,北京 100083)
摘要:建立了一种基于紫外显影法快速筛选烟酸羟基化酶产生菌的方法,用 96 孔板培养菌后,将菌液点样到滤纸
上,利用 6-羟基烟酸在紫外光照射(300 nm)下显影的特性,可以快速、方便地筛选出烟酸羟基化酶产生菌. 对筛选出
的最高酶活菌株 BKC4 进行了研究,菌株为杆状,革兰氏染色呈阴性,通过 16S rRNA 序列分析鉴定为恶臭假单胞菌
(Pseudomonas putida). 利用 BKC4 菌株催化烟酸合成 6-羟基烟酸,结果表明,BKC4 菌株烟酸羟基化酶的最适催化条
件为:底物浓度 10 g/L,温度 37℃, pH ,摇床转速 200 r/min,酶在低于 30℃及 pH ∼ 范围内较稳定.
关键词:烟酸羟基化酶;紫外显影;烟酸;6-羟基烟酸
中图分类号:Q939 文献标识码:A 文章编号:1009−606X(2010)03−0576−06

光光度法筛选烟酸羟基化酶产生菌的方法,具有高通量
1 前言
筛选的特点.
6-羟基烟酸,又名 6-羟基-吡啶-3-甲酸,是一种重针对以往产烟酸羟基化酶菌株的筛选方法需要使
要的吡啶衍生物,是生产烟碱类杀虫农药的重要中间用复杂昂贵仪器并需对检测样品进行处理的不足,本研
体,在医药、染料、材料等领域也有相当重要的地位[1]. 究根据烟酸羟基化酶的催化产物 6-羟基烟酸在紫外光
国内目前主要采用化学法生产 6-羟基烟酸,副产物多、照射下显影的特性,建立了一种无需复杂贵重仪器的高
产量低、成本高、环境污染严重等诸多因素限制了其在通量菌株筛选方法,对利用该法筛选得到的高产菌株的
工业上的应用. 生物法生产 6-羟基烟酸因过程简单、副烟酸羟基化酶的酶学特性及催化工艺进行研究,以期为
产物少、环境污染少等优点越来越受到关注. 利用烟酸生物法催化烟酸生产 6-羟基烟酸的工业应用奠定基础.
羟基化酶可高效催化烟酸生成羟基烟酸,国外从
6- 20 2 实验
世纪四、五十年代就开始了对烟酸羟基化酶产生菌的筛
选[2] ,目前已对假单胞菌(Pseudomonas)[3] 、真杆菌分离土样
(Eubacterium barkeri)[4] 、粘质沙雷氏菌株(Serratia 土样为山东、北京等地生产吡啶类结构物质的工厂
marcescens)[5]等的烟酸羟基化酶进行了研究,国内对利周围的土样.
用微生物法生产 6-羟基烟酸的研究起步较晚[1,6],与有较大差距,距工业化应用还有一些距富集培养基(g/L):酵母粉 5,蛋白胨 10,烟酸 10,
离,因此筛选烟酸羟基化酶高产菌株对实现生物法生产 NaCl 10. pH .
6-羟基烟酸具有现实意义. 选择培