文档介绍：实验4 血清γ-球蛋白的提纯
Purification of serum γ-globulin
遵义医学院生物化学教研室朱欣婷
实验
思路
蛋白质的理化性质有哪些?
蛋白质的分离方法有哪些?
本次实验利用了哪个性质?
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、凝胶层析、透析法分离纯化蛋白质的基本原理及操作;
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分离蛋白质的方法
分离方法
沉淀法
盐析法
有机溶剂沉淀法
层析法
电学法
电泳法
等电聚焦
超速离心法
离子交换层析
吸附层析
凝胶过滤(分子筛)
亲和层析
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定义:加入大量中性盐以破坏蛋白质的稳定因素并
使从溶液中沉淀析出的现象。
原理: 破坏蛋白质两个稳定因素:水化膜和电荷层
中性盐:(NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl等。
优点:蛋白质不变性,常用。
(一)盐析法
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【实验原理】
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(二)层析法
待分离物质(流动相)经过一个固态物质(固定相)时,根据溶液中待分离物质颗粒大小、电荷多少及亲和力等,使待分离蛋白组分在两相中反复分配,并以不同流速流经固定相实现分离。
凝胶层析法
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定义:利用半透膜把大小分子分开的方法。
材料:特制的半透膜,截止分子量一般为一万。
(三)透析法
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临床应用:血液透析
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(四)离心技术
离心技术是将含有微小颗粒的悬浮液置于离心转子中,利用转子绕轴旋转产生的离心力将微小颗粒按密度或质量的差异将其分离的方法。
沉降速度(v) 指在强大的离心力作用下,单位时间内物质颗粒沿半径方向运动的距离。 v=×10-4×D2(ρ-ρm)n2r/ηm
D —颗粒直径
ρ—颗粒的密度
ρm —介质的密度
ηm—介质粘度
r —旋转半径(物质质点所处位置与旋转中心的距离) N —转子转速
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