文档介绍：修︻��饇;燃裁霎羞纛渊�����大鼠与小鼠脑组织脱水方法的实验研究�牧嫌敕椒ā��峁���旌瞎潭ㄒ河梢掖肌⒓兹┘按姿嶙槌桑�灾饰潞停��改芰η浚�潭ň�龋�橹��缩小,有固定兼脱水作用,能很好地保持组织细胞的正常形态结构,起到固定组织,促进染色的作用,切片染色核浆清晰,对比度好��R虼耍�覨固定液是目前我们在冷冻切片中首选的理想固定液。近年来,我们在协助其他单位或研究生做动物实验后的组织病理学研究中发现,若按日常人体标本的脱水时间和程序制备大鼠与小鼠的脑组织蜡块,则在切片后进行染色前处理及染色时会出现严重的脱片现象,从而造成后续工作无法进行。即使在载玻片上涂蛋白甘油、多聚赖氨酸等防脱片剂效果不佳,未脱片者的�染色、特殊染色及免疫组化染色结果也不理想。我们根据大鼠与小鼠脑组织磷脂含量高且与水结合牢固不易脱出的特点做了大量实验,摸索出一套适合于大鼠与小鼠脑组织的脱水方法,现介绍如下。��材料按实验要求取大鼠与小鼠脑组织,大小��实验器具为国产、进口脱水机均可,无脱水机可用玻璃缸手工操作。化学试剂为甲醛、�%乙醇、�%乙醇、�%乙醇、无水乙醇、二甲苯、石蜡�鄣����℃����实验方法��.�阉�奔浼俺绦蛉缬猛阉���墒孪仍诨�系牡缒圆说ブ邪聪卤肀嗯懦绦颉����ジ6�砹忠撼浞止潭��陨希���%乙醇做初级脱水�以上或长时间保存:���乙醇脱水�;���ヒ掖糏:�:���ヒ掖糏������%乙醇������无水乙醇���无水乙醇�:����匏�掖糏�:�:��二甲苯����:��二甲苯�:���唤��石蜡熔点�~�℃����露����℃浸蜡���航�疘���航�疘�:��航�疘������.�9姘�瘛⑶衅�⑷旧��,厚��������×��●■—■—■■—���■—���。
学术论文絮��致�用此脱水方法制得的大鼠与小鼠脑组织的蜡块,在切片时手感柔润,蜡片平整光滑润泽。染色后镜下:组织结构完整,胞核清晰,染色质均匀:胞质透彻,细胞器清晰可见。免疫组化片:反应物明显,背景干净。新旧方法比较:常规组织脱水方法原则要照顾到各种不同器官组织的固定与脱水要求,因此各级高浓度乙醇均不超过�。用常规方法脱水处理的大小鼠脑组织在切片或脱蜡过程中易脱片,切片时有粘刀、蜡片皱褶不易展开等情况,染色结果不理想。切片后的蜡块随着时间的推移而出现表面凹陷现象,说明常规方法脱水不够彻底。而经过改进的脱水方法杜绝了上述问题。��.固定充分和从低浓度乙醇开始脱水非常重要。��.根据资料得知,脑组织中含有大量的磷脂和水,其中磷脂是由含有甘油的脑磷脂和一些不合甘油的神经磷脂组成的。脑磷脂的合成是由甘油三酯的重要中间产物磷脂酸水解为甘油二酯,其为脑磷脂的合成提供脂肪酸和甘油部分,丝胺酸脱羧后生成乙醇胺。乙醇胺和胆碱参与脑磷脂合成前先活化成��乙醇胺,然后合成脑磷脂。脑磷脂在其合成、分解的整个生化活动中伴随有大量的能量的转变和交换��/��。在所有这些生化反应过程中需要大量的水作为媒体环境,故脑组织总合水量大大高于其它组织。再者脑磷脂合成和分解都需要酶的作用,而这部分水分子在静态时与脑磷脂的结合比较��.本方法最大特点是大大延长了大鼠与小鼠脑组织在高浓度乙醇中的脱水时间。一般认为组织在高浓度乙醇内时间过长会使组织交得脆硬,包埋时组织易碎,切片时出现蜡片不完整、薄厚不均、毁刀甚至粉末等问题。实