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研究报告 R E POR TS
海湾扇贝微卫星标记开发及其分离方式分析
李宏俊1 , 2 ,刘晓1 ,杜雪地3 ,宋蕊3 ,张国范1 ,胡景杰4 ,包振民4
(1. 中国科学院海洋研究所, 山东青岛 266071 ; 2. 中国科学院研究2 生2 院, 北京 10020429 ; 3. 山东理工大学
生命科学学院, 山东淄博 255049 ; 4. 中国海洋大学海洋生命学院, 山东青岛 266003)
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摘要:利用尼龙膜吸附杂交法构建了海湾扇贝的(AC) 15 、(A G) 15 微2卫星富集文库,随机挑取 3 000 个克隆,经
菌落原位杂交二次筛选共获得阳性克隆 1 268 个(422. 3 %) 。经序列测定和生物信息学分析后得到 521 个独
立的阳性克隆,其中微卫星 506 个,小卫星 15 个。微卫星中,完美型 248 个,占总数的 49. 0 % ;非完美型 216
个,占 42. 7 % ;复合型 42 个,占 8. 3 % ;其中 A G/ TC 重复占 70. 4 % (356 个) ,AC/ T G 重复 29. 6 %(150 个) 。
选择其中的 55 条序列设计引物,筛选出其中的 20 10 家系的双亲和 94 个子
代个体中的分离情况,结果表明: (1) 其中 6 个位点在母本和子代中发生分离,10 个位点在父本和子代中发
生分离,4 个为双亲共享位点; (2) 2 个位点存在无效等位基因; (3) 16 个位点符合孟德尔遗传定律,4 个位点
的子代个体基因型频率偏离孟德尔遗传定律。上述结果表明,这些微卫星引物可以用于构建海湾扇贝的遗
传连锁图谱,并且所构建的富集文库适用于微卫星标记的大规模开发。
关键词:海湾扇贝( A rgopecten i rradians) ; 微卫星; 富集文库; 无效等位基因; 分离方式
中图分类号:Q173 ; S917 文献标识码:A 文章标号:1000 3096 (2009) 12 0004 05
海湾扇贝( A rgopecten i rradi ans) 不连续分布于
1 材料与方法
美国大西洋沿岸和墨西哥湾沿岸。自 1982 年以来,
经过数次引种, 已分别将海湾扇贝的北部亚种 1. 1 供试样本
(Nort hern bay scallop , A . i. i rradi ans) 和南部亚用来自海湾扇贝北部亚种一个个体的肌肉组织
种( Sout hern bay scallop , A . i. concent ricus) 引入提取 DNA ,构建微卫星富集文库。
到中国,目前已分别成为我国北方海区和南方海区 10 家系建于 2007
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的重要养殖贝类。年,卵子来自海湾扇贝南部亚种的一个个体;精子则
微卫星 DNA (Microsatellite DNA) ,又称简单重采自海湾扇贝北部亚种(卵子供体) 与南部亚种(精
复序列( simple sequence repeat , SSR) ,一般指由 1 子供体) 交配获得的一个杂交个体。10 家系的
~6 个碱基重复单元首尾相连组成的串联重复序列。双亲和 94 个子代个体的闭壳肌组织,提取 DNA