文档介绍：魔芋葡甘露聚糖的酶解
实验所需原料:
魔芋精粉;
 缓冲液(需用 Na2HPO4 ・12H2O ,NaH2PO4 ・2H2O 配制);
β - 甘露聚糖酶( 10000u/g);
DNS 试剂(由 3, 5-二硝基水杨酸, NaOH ,酒石酸钠,苯酚,偏重亚硫酸钠配制) 。
实验所需器材及仪器:
1000ml 容量瓶 (2 个) ;
滴定管(量取或配制溶液时使用) ;
250ml 锥形瓶;
恒温水浴锅;
恒温振荡器;
冷冻离心机;
紫外 -可见分光光度计;
移液枪
预实验:
1. PBS 缓冲液的配制:
(1)母液的配制:
 Na 2HPO 4:称取 ,溶于 1000mL 水
・
 NaH 2PO 4:称取  NaH2PO4 2H 2O,溶于 1000mL 水
・・
(2)   NaH 2PO4 2H 2O + Na 2HPO4 12H 2O
・・
38mL  NaH 2PO 4 2H 2O +62mL Na 2HPO4 12H 2O
・・
  NaH 2PO4 2H 2O + Na 2HPO4 12H 2O
这只是大致比例,精确 pH 值需用 pH 计配制。
pH 计使用方法:
 试剂的配制方法
(1)称取 3,5-二硝基水杨酸 , NaOH  充分溶解于 500mL 煮沸的蒸馏水中(煮沸是为了加
速溶解)。
(2)加入酒石酸钠 ,苯酚 ,偏重亚硫酸钠  于上一步的溶液中,加热搅拌至全部溶解,
冷却,用蒸馏水定容至 1000mL 。
(3)充分溶解后盛于棕色瓶中,储存 1 周后使用。
实验步骤:
⑴打开水浴锅,设定温度为 50℃.
⑵用量筒量取 100ml 一定 pH 的 PBS 缓冲液于锥形瓶中, 塞上塞子置于水浴
锅中加热,至 50℃(可用温度计量) 。
⑶用称量纸称取  的魔芋精粉备用。 待锥形瓶中缓冲液温度达 50℃后将
称好的魔芋精粉缓慢加入到锥形瓶中, 边加边摇 荡锥形瓶 (防止结块, 同时加时
也要避免因魔芋粉粘到瓶壁上而造成损失) 。全部加入后要 定期振荡 锥形瓶以使
瓶壁上粘附的魔芋精粉都能充分溶胀 (每隔 3min 振荡 50 次)。溶胀时间为 40min。
⑷用称量纸称取一定量的 β- 甘露聚糖酶备用。待魔芋精粉溶胀完全后小心
加入到锥形瓶中,混匀。置于恒温振荡器中反应一定时间 ( )。
⑸反应完后取出锥形瓶置于 沸水水浴锅 中煮沸 8min 灭酶活,得到酶解液。
⑹取 适量 酶解液于离心管中,放到离心机中离心 10min,转速为 5000r/min 。
(注意离心机使用时应 遵循对称、等重的原则 。)
⑺离心结束后取出离心管。 用移液枪移取 2ml 上清液于 10ml 的带塞试管 中,
再加入 2mlDNS 试剂(显色作用) 及 4ml 同种 pH 值的 PBS 缓冲液(稀释作用)。
将试管放入 沸水浴中 煮沸 5min,观察试管中颜色的变化。该步为定