文档介绍：鸡抗菌肽(Att)试剂盒使用方法
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围: 96T
1pg/ml-40pg/ml
使用目的:
本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中抗菌肽(Att)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡抗菌肽(Att)水平。用纯化的鸡抗菌肽(Att)抗体
包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入抗菌肽(Att),再与HRP 标记的
抗菌肽(Att)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样
品中的抗菌肽(Att)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲
线计算样品中鸡抗菌肽(Att)浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品(64pg/ml) ×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 ×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
32pg/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
16pg/ml 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
8pg/ml 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
4pg/ml 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2pg/ml 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,
然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此
重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定