文档介绍：蛋白盐析实验步骤及注意事项
一、实验步骤:
       蛋白质盐析常用的中性盐,主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、***化钠、磷酸钠等。其中应用最多的硫酸铵,由下表可以看出:它的优点是温度系数小而溶解度大(20度时饱和溶液为754克/升;0度时饱和溶解度为706克/升),在这一溶解度范围内,许多蛋白质和酶都可以盐析出来;另外硫酸铵分段盐析效果也比其他盐好,不易引起蛋白质变性。-,当用其他pH值进行盐析时,需用硫酸或氨水调节。
表1 几种盐在不同温度下的溶解度(克/100毫升水)
 
饱和硫酸铵法:
1. 取x ml血清加x ml生理盐水,于搅拌下逐滴加入2xml饱和硫酸铵,硫酸铵的终饱和度为50%。
2.  4℃,3h以上,使其充分沉淀离心(3000rpm),20min,充上清,以xml生理盐水溶解沉淀,再逐滴加饱和硫酸铵x/2ml。
3. 置4℃3h以上,[此时,(NH4)2SO4的饱和度为33%]重复上述第二步过程1~2次。末次离心后所得沉淀物为蛋白,%mol/L 。
4. 对PBS充分透析、换液3次,至萘氏试剂测透析外液无黄色,即无NH4+为止。蛋白质在用盐析沉淀分离后,需要将蛋白质中的盐除去,常用的办法是透析,即把蛋白质溶液装入透析袋内(常用的是玻璃纸),用缓冲液进行透析,并不断的更换缓冲液,因透析所需时间较长,所以最好在低温中进行。此外也可用葡萄糖凝胶G-25或G-50过柱的办法除盐,所用的时间就比较短。
二、注意事项:
1. 盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度,溶液pH值越