文档介绍：实验四酶的特异性
生物化学实验之--
山东师范大学生命科学学院
【实验目的】 学****酵母蔗糖酶(粗提液)和唾液淀粉酶的制备,了解酶的特异性及检测方法。
【实验原理】 酶是生物催化剂,酶对所作用的底物有严格的选择性,即酶的特异性。
淀粉和蔗糖都是非还原性糖,分别为唾液淀粉酶和蔗糖酶的专一底物。淀粉被唾液淀粉酶水解生成具有还原性的麦芽糖,蔗糖被蔗糖酶水解生成具有还原性的葡萄糖和果糖。
Benedict试剂(含有Cu 2+)常用于检验还原糖的存在,其被还原后生成砖红色的Cu2O沉淀。
【器材及试剂】
(一)器材:
1. 恒温水浴锅 2. 试管及试管架
3. 离心机 4. 吸量管
、量筒、漏斗等
(二)试剂:
1. 2%蔗糖
2. 1%淀粉(%的NaCl)
3. 唾液淀粉酶溶液
4. 蔗糖酶溶液
5. Benedict试剂
【实验步骤】
(一)淀粉酶的特异性
:
先用蒸馏水漱口,然后用洁净试管1支,
取唾液(无泡沫)约2ml,蒸馏水20倍稀释,
备用。
,标号,按下表所列的次序操作:
试剂
试管编号
1
2
3
4
5
1%淀粉溶液(ml)
—
—
—
2%蔗糖溶液(ml)
—
—
—
唾液淀粉酶(ml)
—
—
蒸馏水(ml)
—
—
3. 摇匀,置37℃恒温水浴保温10min,然后每管加入Benedict试剂2ml,再放沸水浴5min。观察各管颜色变化,并解释实验结果。
(二) 蔗糖酶的特异性
1. 蔗糖酶溶液的制备:
,置于研钵中,加少量蒸馏水及石英砂研磨提取约10min,再加蒸馏水至总体积约为20ml,过滤或离心,滤液或上清液备用。
2. 取试管5支,标号,按下表所列的次序操作:
试剂
试管编号
1
2
3
4
5
1%淀粉溶液(ml)
—
—
—
2%蔗糖溶液(ml)
—
—
—
蔗糖酶(ml)
—
—
蒸馏水(ml)
—
—
3. 摇匀, 置37℃恒温水浴保温10min,然后每管加入Benedict试剂2ml,再放沸水浴5min。观察各管颜色变化,并解释实验结果。
【注意事项】 唾液的稀释倍数因人而异,有时差别很大,稀释倍数可以是50~300倍。
【思考题】
1、若将淀粉酶和蔗糖酶煮沸1min,实验结
果会发生什么样的变化?
2、酶作用的专一性有哪几种?