文档介绍：洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察实验报告
吴若自然科学大类 ********** 单周四 119 2016/11/17
实验目的:
掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法。
认识细胞骨架的形态,联系细胞骨架的功能。
实验原理:
细胞骨架是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中间纤维。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。本试验采用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时,可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉,但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来,后者用考马斯亮蓝R250 染色,在光学显微镜下可见一种网状结构。
操作步骤:
取洋葱内皮表层膜1cm2 (可多取两片)左右置于含2mlPBS液的小皿中湿润5min后,吸去PBS
-100(1%),浸没20min后,吸走TritonX-100
向小皿中加入2mlMbuffer浸没置于摇床上5min,重复两次后,吸走Mbuffer
向小皿中加入105ml戊二醛(3%),浸没30min后,吸走戊二醛
向小皿中加入2mlPBS,浸没置于摇床上5min,重复两次
取出表皮平铺于载玻片上,滴加100微升,静置100min后吸取染料
向表面滴加蒸馏水洗涤后用纸巾洗去液体,重复两次
盖上盖玻片,擦去残余液体,用光学显微镜观察并拍照记录
实验结果:
如图所示,洋葱内表皮细胞轮廓清晰可见,细胞壁及其分界明显可见。可观察到线性纤维交织而成的网状结构,同一细胞内各处骨架密集度不均匀,细胞核区域纤维较密
集,蓝色较重。调节显微镜焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化,表明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞内。
思考题:
简述细胞质骨架的基本类型及结构特征
答:微管:中空的圆筒状结构,直径为18nm~25nm,构成微管的主要成分是微管蛋白。这种蛋白有两个亚基,即α,β亚基它们成螺旋形排列。进化高度保守。
微丝:由肌动蛋白组成的直径约为7nm的骨架纤维,单体形式的球形肌动蛋白聚合形成纤维形肌动蛋白,在微丝结合蛋白的辅助作用下形成微丝高级结构